通过系统研究,可确立了基于纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)填充剂的手性分离体系:
流动相优化:正己烷-异丙醇-乙腈(750:200:50)三元体系,通过调节极性差异实现基线分离
色谱柱选择:LuxChIralCellulose-1柱(250×4.6mm,5μm)能提供>3.27的分离度
检测参数:260nm紫外检测,0.9mL/mIn流速,25℃柱温条件下RSD<0.2%
该方法显著优于常规高效液相色谱分析工厂采用的C18柱体系,对映体出峰时间差达4.5分钟,完全满足<手性药物质量控制研究技术指导原则>对工艺中间体的控制要求.
通过系统的验证试验证实该方法的可靠性:
线性范围:0.09-5μg/mL内R²=0.9999
检测限:0.19μg/mL(S/N=3)
定量限:0.46μg/mL(S/N=10)
回收率:100.5%-102.7%(RSD<5%)