以华根霉(RhIzopuschInensIsCICC3043)为例,其发酵转化工艺包含三个关键技术环节:
1.种子培养阶段:采用马铃薯培养基(200g/L马铃薯浸出液+20g/L葡萄糖)在25℃,160rpm条件下培养24小时
2.生物转化阶段:每400mL培养基添加20mgPPD底物(溶入甲醇),持续转化5天
3.分离纯化阶段:经乙酸乙酯萃取后,先后采用硅胶柱层析(氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱)和反相HPLC(乙腈-水系统)进行纯化
该路线可高效制备三种活性衍生物:
-12-羰基-7β,15α-二羟基衍生物(收率21%)
-12-羰基-7β-羟基衍生物(收率35%)
-12-羰基-7β,27-二羟基衍生物(收率18%)
其中12-羰基-7β,15α-二羟基衍生物的分离纯度可达98.2%,满足药用原料标准,这一成果使相关抗癌药物中间体工厂实现了规模化生产.