C-RAF抗体
C-RAF抗体是一种特异性识别和结合C-RAF蛋白的抗体.C-RAF是一种丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的激酶,参与调控细胞生长,分化和凋亡等过程. C-RAF抗体是针对磷酸化原癌基因c-Raf(也称为RAF1,v-raf-1 murine leukemia viral oncogene homolog 1等)的特异性抗体.它能够识别并结合c-Raf蛋白,特别是磷酸化在Ser339位点的c-Raf蛋白.
📌 参考资料/链接：
Wild-Type and Mutant B-RAF Activate C-RAF through Distinct Mechanisms Involving Heterodimerization[J].Mathew J.Garnett;;Sareena Rana;;Hugh Paterson;;David Barford;;Richard Marais.Molecular Cell,2005(6)
📄 详细内容
C-RAF抗体可以用于c-raf在精原干细胞中的表达及作用的研究
完善大鼠精原干细胞的分离和体外培养技术;研究c-raf对精原干细胞体外培养的存活作用及机制.
方法:非连续密度梯度离心及差速贴壁法分离精原干细胞;c-kit细胞C-RAF抗体免疫组织化学鉴定精原干细胞;基因测序和SeqMan,检验精原干细胞扩增DNA和c-raf的同源性;MTT比色法检测体外培养精原干细胞的存活及增殖情况,观察c-raf AON对精原干细胞体外培养存活的量效关系及c-raf AON对精原干细胞体外培养存活的时效关系;RT-PCR检测c-raf mRNA和caspase-3 mRNA的表达情况;TUNEL检测c-raf AON对精原干细胞凋亡的影响.
C-RAF抗体结果:非连续密度梯度离心及差速贴壁法分离的精原干细胞,经台盼蓝染色计数其存活率分别为92.3%和91.5%;分离后的精原干细胞经c-kit鉴定其纯度为90.1%;精原干细胞在含10%NBS的DMEM中培养120h时增殖达高峰,在无10%NBS的DMEM中培养其存活率持续下降;精原干细胞扩增DNA和c-raf的同源性为98%;15µmol/L c-raf AON作用12h后精原干细胞存活率下降(P<0.05),于18h后存活率持续下降(P<0.05);与对照组相比c-raf AON组的c-raf mRNA水平明显下调(P<0.05),而caspase-3 mRNA表达水平明显上调(P<0.05);c-raf AON组凋亡指数(40.5%)明显大于对照组(30.2%)和错义组(29.4%)的凋亡指数(P<0.05).结论:非连续密度梯度离心结合差速贴壁法是分离精原干细胞的有效方法;c-kit可作为鉴定精原干细胞的分子标志物;精原干细胞在含10%NBS的DMEM培养基中短期增殖;c-raf在九天的雄性SD大鼠的精原干细胞上表达;c-raf可能通过抑制凋亡而促进精原干细胞存活;c-raf可能通过下调capspase-3的表达而抑制精原干细胞凋亡.
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