53BP1抗体
53BP1抗体是一种针对53BP1(Tumor Protein P53 Binding Protein 1)蛋白的特异性抗体.53BP1蛋白在DNA损伤反应中扮演重要角色,包括促进DNA损伤后的检查点信号传导,充当将DNA损伤反应蛋白募集到受损染色质的支架,以及通过限制双链断裂后的末端切除来促进NHEJ(非同源末端连接)通路等. 这种抗体通常用于研究53BP1蛋白在细胞和组织中的表达情况,以及53BP1蛋白与其他蛋白的相互作用.通过免疫组织化学(IHC),免疫细胞化学(ICC/IF),免疫印迹(WB)和流式细胞术(FC)等实验方法,可以检测和分析53BP1蛋白的定位,表达和功能. 此外,最近的研究还发现53BP1在调节DNA结构方面也具有一定的生物学功能,特别是在异染色质的高度致密区域.53BP1会在染色质区域积聚并形成小液滴,从而帮助维持基因组稳定性.这些发现进一步揭示了53BP1蛋白在细胞生物学和疾病发生中的重要作用.
📌 参考资料/链接：
When the chains do not break:the role of USP10 in physiology and pathology[J].Bhattacharya Udayan;Neizer Ashun Fiifi;Mukherjee Priyabrata;Bhattacharya Resham.Cell Death&Disease,2020
📄 详细内容
53BP1抗体可以用于长链非编码RNA SCARNA2介导的DNA损伤修复在结直肠癌放疗敏感性中的作用及机制
Lnc RNA SCARNA2在DNA损伤修复中的作用探讨1,RIP-seq筛选ATR结合的lnc RNA首先选用ATR抗体通过RNA免疫共沉淀方法(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)富集与ATR结合的RNA,通过高通量二代测序筛选与ATR结合的lnc RNA,选取排名前30位的lnc RNA,然后通过RIP和RT-PCR的方法验证它们与ATR的相互作用关系,发现SCARNA2与ATR的结合丰度最高,因此将目标靶分子确定为SCARNA2.通过探究SCARNA2在15种细胞系的基础表达量,确定研究细胞系为结肠癌细胞系HCT116和HT29.2,DNA损伤对SCARNA2表达水平的影响将HCT116和HT29细胞经电离辐射(Ionizing radiation,IR),DNA损伤诱导剂喜树碱(Camptothecin,CPT)或依托泊苷(Etoposide,ETO)处理后,在不同时间点分别提取细胞的RNA,经反转录和RT-PCR检测SCARNA2转录水平的变化.将HCT116和HT29细胞分别与DDR通路抑制剂(DNA-PKcs抑制剂Nu7441,ATM抑制剂Ku-55933,ATR抑制剂VE-821)孵育后,再分别用IR,CPT或ETO处理细胞后,在SCARNA2响应DNA损伤最明显的时间点提取RNA,RT-PCR检测DDR通路抑制剂对SCARNA2转录水平的影响.3,SCARNA2对DNA损伤修复通路的影响通过慢病毒包装质粒系统构建SCARNA2敲低(sh-SCARNA2),CRISPR Cas9敲除(sg-SCARNA2)和过表达(SCARNA2-OE)稳转细胞系,通过RT-PCR测定下调和过表达效率.通过彗星电泳检测SCARNA2下调细胞照后的DNA损伤程度;通过53BP1抗体免疫荧光的方法检测SCARNA2干扰细胞在照后0,0.5,4,8,12和24 h形成γH2AX和53BP1 f℃i的动态变化情况.最后通过蛋白凝胶电泳(Western Blot,WB)的方法检测SCARNA2下调细胞经IR,CPT或ETO处理后,DDR通路相关蛋白分子的表达水平变化情况.
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