ANTI-CDC34
ANTI-CDC34是ANTI-CDC34为抗原制得的免疫抗体,可以特异性结合CDC34.主要用于检测CDC34的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 在人类基因组编码两个E1酶,至少38种E2酶,以及超过600种不同E3酶,其中的每一个具有潜力来识别多个基板.的E3酶家族,cullin-RING连接酶(CRLs),最初被发现为多亚基Skp1-Cdc53/Cullin-F盒蛋白(SCF)泛素连接酶.SCF复合物包含核心亚基Skp1,Cdc53/Cul1和Rbx1/R℃1/Hrt1以及一组称为F box蛋白的衔接子亚基,其通常以磷酸化依赖性方式募集特定底物至核心复合物.
📌 参考资料/链接：
Ubiquitylation,neddylation and the DNA damage response[J].Jessica S.Brown,Stephen P.Jackson.Open Biology.2015(4)
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用于CDC34活性半胱氨酸对自身稳定性的调控及CDC34相互作用蛋白的鉴定与功能研究
把CDC34的活性位点93位的半胱氨酸进行了点突变,探索了突变体对其自身泛素化和稳定性的影响,使用野生型和突变体来纯化并用LC-MS/MS寻找CDC34相互作用蛋白,然后对这些蛋白进行了验证和相互调控关系的研究.
研究方法:构建带有Strep-FLAG标签的野生型CDC34以及突变型的CDC34 C93S质粒,在HEK293T细胞中表达CDC34野生型和突变体,蛋白免疫印迹在全蛋白中检测野生型和突变体的表达情况,检测活性位点突变对CDC34自身稳定性和泛素化的影响;
利用免疫沉淀的方法将与CDC34相互作用的蛋白进行纯化,然后利用银染检测差异相互作用蛋白,利用LC/MS-MS分析酶解后的多肽;通过蛋白质数据库(UniProt)搜索,筛选出在对照组,野生型以及突变型相互作用差异较大的蛋白,获得潜在的与CDC34相互作用的蛋白质,运用生物信息学的方法分析这些蛋白质的功能,并通过蛋白质印迹验证它们与CDC34的相互作用及调控关系.
研究结果:(1)CDC34C93S显著抑制了CDC34C93S自身的泛素化修饰,使其稳定性增加.(2)CDC34C93S突变体能增加部分相互作用蛋白的稳定性.(3)质谱分析鉴定到了MCM7,PRKDC,GNL3等与CDC34相作用的蛋白质,并且CDC34能上调MCM7的水平,下调GNL3的蛋白水平.
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