Anti-NeuN(rabbit polyclonal)是以Anti-NeuN为抗原的多克隆抗体,可以特异性结合Anti-NeuN.Anti-NeuN(rabbit polyclonal)主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等Anti-NeuN检测实验. 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性.这种特性是由抗原,抗体分子空间构型所决定的.除两者分子构型高度互补外,抗原表位和抗体超变区必须密切接触,才有足够的结合力.
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用于ERK-TRPV4通路在大鼠背根神经节持续受压致痛觉敏感中的作用机制研究
取实验大鼠随机分为5组,分别给予生理盐水,shRNA 10^4病毒单位(toxic units,TU),10^5 TU,10^6 TU和10^7 TU,每组各位6只大鼠.各组中,每只大鼠鞘内注射体积均为10uL,连续注射3天.自第1天注射开始计算,第5天时,生理盐水心脏灌注后取材.随后利用Western Blot及RT-qPCR的方法,进行检测并评价慢病毒鞘内注射的效果从而确定慢病毒的注射滴度.
蛋白印记法测定CCD后DRG及脊髓背角组织中的蛋白表达手术侧L4及L5背根神经节以及相应节段的脊髓背角,提取总蛋白.SDS-PAGE凝胶电泳法使蛋白分离,转印蛋白至PVDF膜,室温封闭,一抗及二抗孵育后显影.检测鞘内注射慢病毒干扰ERK后,DRG及脊髓背角组织中TRPV4,ERK及P-ERK蛋白表达变化.
实时定量荧光PCR测定DRG及脊髓背角组织中mRNA的表达变化手术侧L4及L5背根神经节及相应节段的脊髓背角,快速取材,提取总RNA,测定浓度.利用Real-time quantitative PCR检测DRG及脊髓背角组织中TRPV4,ERK1及ERK2的mRNA表达变化.各指标的引物序列同部分.
免疫共沉淀使用IP-WB裂解液,提取DRG和脊髓背角的组织总蛋白后,采用Prorein A-argarose方法,分别用anti-TRPV4抗体和anti-ERK抗体与之反应,进行免疫共沉淀结合.沉淀后的复合物利用蛋白印记法进行分析,分别观察各组中是否存在所需目的蛋白.
脊髓和DRG的免疫组织化学染色一抗为:anti-NeuN多克隆抗体(小鼠抗大鼠,1:300,Abcam,USA);anti-ERK多克隆抗体(兔抗大鼠,1:500,CST,USA);anti-P-ERK多克隆抗体(兔抗大鼠,1:200,CST,USA);anti-TRPV4多克隆抗体(兔抗大鼠,1:200,Abcam,USA).二抗为:辣根过氧化物酶标记-山羊抗小鼠IgG,辣根过氧化物酶标记-山羊抗兔IgG(北京义翘神州科技有限公司).经DAB显染色和苏木素染核后,观察目的蛋白的组织定位.
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