3T3-L1/小鼠胚胎成纤维细胞

用于奥氮平介导的3T3-L1细胞SREBPs通路的脂代谢调控与药物联合作用研究
通过Berberine通过调节SREBPs相关途径(包括PPARγ和C/EBPα),抑制3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞,人类白前脂肪细胞以及高脂肪饮食诱导的肥胖鼠模型中的脂肪细胞分化过程中脂肪生成.因此Berberine与Olanzapine联合用药,能否干预Olanzapine介导的3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞脂代谢变化,从而应用于临床上Olanzapine引起的脂代谢紊乱,值得研究.
在3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪细胞)水平上,建立Olanzapine诱发脂代谢的成熟脂肪细胞模型,研究Olanzapine通过SREBPs途径诱发的脂代谢副作用,分析他汀类药物和Berberine对其的干预作用及其分子机制.
方法:采用MTT比色法考察DMSO,Olanzapine,Simvastatin,Atorvastatin,Berberine等对3T3-L1细胞增殖的影响,从而找出上述药物具有较低细胞毒性的浓度范围;利用倒置显微镜观察细胞形态,油红O染色脂滴,试剂盒检测TG,TC含量,RT-qPCR基因转录分析及Western blotting分析蛋白表达四个方面来考察Olanzapine是否成功诱导形成成熟脂肪细胞模型,并且选出的Olanzapine浓度;在此基础上选择以上四个方面来研究他汀类药物和Berberine是否干预Olanzapine介导的脂代谢变化以及相关分子机制.
结果:1.Olanzapine介导的脂代谢变化细胞模型的建立Olanzapine能促进脂肪细胞脂滴的形成,在低于10µmol/L浓度,呈剂量依赖性,超过10µmol/L后诱导效果不明显.并且在10µmol/L浓度时对TG,TC含量,基因转录水平,蛋白表达水平都有一定的下调作用.
2. Simvastatin对Olanzapine引起的脂代谢变化的干预作用在2.5µmol/L和5µmol/L Simvastatin作用下,可看到细胞形态观察的改变以及油红O染色脂滴数量的下降,TG,TC含量测定,基因转录分析及蛋白表达水平方面都进一步验证了Simvastatin可以干预Olanzapine引起的脂代谢变化.
3.Atorvastatin对Olanzapine诱发的脂代谢变化的影响在2.5µmol/L和5µmol/L Atorvastatin作用下,基本上看不到细胞形态观察的改变以及油红O染色脂滴数量的下降,在TG,TC含量测定,基因转录分析及蛋白表达水平等方面也没有较大的变化.
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