BHK-21[C-13](仓鼠肾成纤维细胞)是I.A.Macpherson和M.G.P.Stoker从1日龄的仓鼠建立了BHK-21(C-13)的亲本.随后84天连续培养,仅中断8天进行冻存,通过单细胞分离建立了13号克隆.这株细胞可用作转染宿主,用于表达包含选择及扩增标记的DNA(如Factor VIII,见ATCC CRL-8544)的载体.
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用于工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞自噬的诱导作用研究
早期的研究表明极低频磁场可以诱导细胞分子水平的改变,如:细胞缝隙连接功能(GJIC)下降,细胞膜表皮生长因子受体(EGFR)和肿瘤坏死因子受体(TNFR)聚簇,以及基因和蛋白质表达谱发生改变等等.细胞自噬是机体重要的一种防御和保护机制,它大量降解并重复利用长寿命蛋白质,大分子物质以及细胞内受损的细胞器等,使细胞能够在饥饿环境下得以生存,细胞自噬和神经退行性疾病,衰老以及肿瘤相关.
方法:CHL细胞培养24小时,更换新鲜的培养基后进行50Hz0.4mT工频磁场暴露30分钟,2小时,6小时,12小时或者24小时,磁场暴露后通过以下三种方法检测细胞自噬水平:透射电镜观察细胞内空泡变化,激光共聚焦显微镜检测细胞内GFP-LC3定位自噬小体情况以及Western Blot实验检测细胞内LC3-Ⅱ表达.结果:透射电子显微镜观察到,工频磁场暴露30分钟和24小时诱导细胞内空泡增加;激光共聚焦显微镜观察到,在GFP-LC3高表达的CHL细胞内,工频磁场暴露不同时间点诱导GFP-LC3亮点标记的自噬小体增加(P>0.05),30分钟和24小时升高趋势较为明显;
Western Blot技术检测发现磁场暴露促进自噬的特异性标记蛋白LC3-Ⅱ表达增加(P>0.05),30分钟和24小时升高趋势较为明显;加入自噬小体与溶酶体融合的阻断剂氯喹后,磁场暴露30 min自噬流量增加(P<0.05).结论:这些研究提示本实验条件下50Hz0.4mT工频磁场暴露可能诱导CHL细胞自噬效应.
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