Anti-HCCS抗体
Anti-HCCS抗体是一类可以特异性结合Anti-HCCS的多克隆抗体,主要用于检测Anti-HCCS的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中Anti-HCCS水平.用纯化的Anti-HCCS抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Anti-HCCS,再与HRP标记的Anti-HCCS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的Anti-HCCS呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中Anti-HCCS浓度.
📌 参考资料/链接：
The Drosophila Tumor Suppressor vps25 Prevents Nonautonomous Overproliferation by Regulating Notch Trafficking[J].Thomas Vaccari,David Bilder.Developmental Cell.2005(5)
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用于腺病毒介导的HCCS1基因抗肿瘤作用及其机制的研究Prohibitin(PHB)作为肿瘤血清标志物的初步研究
HCCS1是通过对肝细胞癌病人染色体17p13.3区域的杂合性缺失进行分析发现的新抑癌基因.研究显示,在肝细胞癌组织中HCCS1的表达水平明显低于癌旁正常组织.将HCCS1基因克隆后转染人肝癌细胞株发现,其在体外和体内均可以明显抑制肝癌细胞的生长.上述结果显示了HCCS1基因在肝癌的发生,发展过程中起着重要的作用,同时提示了其作为抗肿瘤治疗基因的应用价值.
以腺病毒为载体探讨HCCS1作为治疗基因在肿瘤生物治疗中的运用前景,并对其抑癌作用的分子机制做了初步的探索.利用AdEasy系统构建并包装携带有HCCS1基因的复制缺陷型腺病毒Ad-HCCS1,并通过半定量RT-PCR和Western blot确定证实Ad-HCCS1感染能介导细胞HCCS1的高表达.
将重组病毒感染293细胞进行大量扩增,通过CsCl梯度离心纯化病毒,并运用293细胞空斑形成实验对纯化的Ad-HCCS1和对照腺病毒Ad的滴度进行测定,其滴度分别为4.5×1010和3×1010.细胞存活试验结果显示Ad-HCCS1对人肝癌细胞BEL7404和人结肠癌细胞SW620的生长具有显著的抑制作用(P＜0.01),而对人正常胚肺成纤维细胞NHLF的作用较弱.
对其分子机制的研究发现,在HCCS1诱导的细胞凋亡过程中,Bcl-2家族成员Bax而非Bid被剪切,并插入线粒体膜,引起细胞线粒体膜电位的改变,从而导致细胞色素C(Cyto C)的释放.释放到胞浆的Cyto C进一步通过活化caspase-9和caspase-3促进细胞的凋亡,caspase-9特异性抑制剂或caspase广谱抑制剂都能明显缓解HCCS1诱导的细胞凋亡.而在凋亡过程中则未检测到caspase-8和caspase-12的活化.HCCS1高表达也能导致AIF从线粒体释放到胞浆,但其并不进一步转位入细胞核促进凋亡.
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