CLASPIN抗体

CLASPIN抗体可以用于LncRNA DLEU1对肝癌的抑制作用及汉黄芩素干预的机制研究
lncRNA DLEU1(Deleted in lymph℃ytic leukaemia 1)在多种肿瘤(包括膀胱癌,宫颈癌,胰腺癌,大肠癌以及卵巢癌等)中异常表达,且与多种肿瘤的不良预后相关,在肿瘤的发生,发展过程中起重要调控作用,但是DLEU1在肝癌的发生和发展进程中的作用方式及其分子机制尚需要进一步研究.
采用凋亡蛋白CLASPIN抗体检测芯片筛选汉黄芩素对肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中凋亡相关蛋白的影响;通过在肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中转染特异性靶向Claspin的siRNA后,通过流式细胞术检测Claspin干扰表达对肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞周期进程和细胞凋亡的影响;采用建立腺病毒介导的YAP过表达以及TAZ过表达的SMMC7721细胞和HCCLM3细胞模型,通过流式细胞术和CLASPIN抗体的Western blot实验检测汉黄芩素能否通过Hippo通路下调Claspin表达来诱导肝癌细胞周期阻滞和细胞凋亡.此外,通过RNA dotblot和免疫荧光实验初步研究了汉黄芩素对SMMC7721和HCCLM3细胞中RNA m6A修饰的影响.
结果:CCK-8实验检测结果显示,汉黄芩素以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞活力;细胞周期及细胞凋亡检测结果显示,汉黄芩素可以促进肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的G2/M期阻滞并诱导肝癌细胞凋亡.RNA-seq检测结果显示,汉黄芩素处理后的SMMC7721细胞中差异表达基因中有1578个上调,2432个下调;KEGG分析显示,汉黄芩素诱导的差异表达基因在Hippo信号通路富集明显;RT-qPCR验证结果显示,汉黄芩素可以下调肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中CTGF,CYR61和Claspin,上调细胞中p21.Western blot及CLASPIN抗体免疫荧光染色结果显示,汉黄芩素可降低肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞核中YAP/TAZ分布,并增加YAP/TAZ在细胞质中的分布;同时Western blot结果显示,汉黄芩素可上调肝癌细胞中p-YAP,p-TAZ,pLATS1和pMOB1.
CLASPIN抗体抗体检测芯片筛选出汉黄芩素处理后的肝癌细胞中Claspin明显下调;细胞周期和细胞凋亡检测结果显示,Claspin干扰表达可促进肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的G2/M期阻滞并诱导肝癌细胞凋亡;而YAP过表达或TAZ过表达均可以部分逆转汉黄芩素诱导的SMMC7721细胞和HCCLM3细胞的细胞周期阻滞和细胞凋亡;Western blot实验结果进一步证明,YAP过表达或TAZ过表达均可部分逆转汉黄芩素对SMMC7721细胞和HCCLM3细胞中Claspin蛋白的抑制作用.此外,RNA dot blot和免疫荧光实验结果表明,汉黄芩素可以下调SMMC7721和HCCLM3细胞的RNA m6A修饰水平.结论:汉黄芩素可能通过激活MOB1-LATS1信号抑制肝癌细胞中YAP和TAZ的活性,下调Claspin的表达,从而诱导肝癌细胞的细胞周期阻滞和细胞凋亡.
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