CBL抗体
CBL抗体是一种可以特异性结合CBL的人工合成抗体,可以靶向结合人,小鼠,大鼠和猪样品中的CBL蛋白.CBL抗体可用于多种科学应用,包括Western Blot,免疫组织化学,免疫细胞化学,免疫沉淀和ELISA. CBL是一种E3泛素连接酶,在调节免疫反应和维持T细胞稳态方面发挥着关键作用.通过介导关键信号蛋白的泛素化和降解,CBL是T细胞活化的重要调节因子,有助于预防自身免疫.了解CBL的机制对开发新的免疫学治疗策略具有重要意义.研究人员可以利用CBL单克隆抗体在各种实验环境中研究蛋白质的表达,定位和相互作用.目前利用CBL单克隆抗体进行的研究正在扩展免疫系统调节及其对人类健康影响的知识.正在进行的CBL单克隆抗体研究将继续揭示免疫细胞信号通路的新知识.
📌 参考资料/链接：
Structural Diversity of Ubiquitin E3 Ligase[J].TomaFukai Sachiko;Shimizu Toshiyuki.Molecules.2021
📄 详细内容
CBL抗体可以用于CBL诱导多发性骨髓瘤细胞迁移和干性增强的作用机制研究
利用微流控芯片分选技术筛选出与细胞骨架和细胞柔性密切相关的潜在MM药物靶标---E3泛素连接酶CBL(Casitas B-lineage lymphoma,Cbl),旨在阐明潜在药物靶点CBL增强MM细胞迁移和干性的分子机制,为MM诊疗和药物发现提供新靶标.研究方法:1.基于微流控芯片分选技术筛选柔性形变MM细胞亚群,通过CCK-8法验证分选得到的MM细胞在增殖方面有差异,通过Transwell迁移实验验证分选细胞在迁移方面差异;然后对具有增殖和迁移优势的MM细胞进行RNA-seq转录组测序筛选出差异表达基因CBL.
2. 采用慢病毒包装CBL过表达(Overexpression,OE)的质粒,并转染至MM野生型细胞株ARP1和CAG细胞,利用嘌呤霉素筛选,构建过表达CBL的MM稳转细胞株(ARP1 CBL-OE和CAGCBL-OE);通过CBL抗体WB(Western blot)实验验证稳转细胞株构建成功与否,CCK-8法和软琼脂克隆实验检测过表达细胞与野生型细胞的增殖情况,Transwell迁移实验验证CBL过表达细胞与野生型细胞在细胞迁移方面的差异,ALDH法验证过表达CBL在细胞干性方面的影响,并通过微流控芯片再验证过表达CBL细胞流出变化情况.
3. 免疫沉淀结合蛋白质谱技术(Co-IP/MS)筛选过表达CBL下调的下游靶蛋白并探究增强MM细胞迁移和干性的下游通路.利用CBL抗体WB实验,核质分离实验和免疫荧光实验验证CBL与下游蛋白的互作关系及下游通路.
4. 由于CBL是E3泛素连接酶的成员,假设CBL可能通过靶蛋白介导的泛素化影响下游通路.通过泛素化实验,CHX(50µg/mL)处理验证CBL对TJP2的泛素化降解,半衰期稳定性情况.
CBL抗体研究结果:1.微流控芯片分选技术筛选出柔性形变MM细胞亚群;CCK-8法证实分选得到的MM细胞增殖能力明显增强;Transwell迁移实验表明分选后的MM细胞迁移能力增强;对具有增殖和迁移优势的MM细胞进行RNA-seq转录组测序,筛选出与MM恶性程度密切相关的CBL基因.2.CBL抗体WB结果显示ARP1 CBL-OE,CAG CBL-OE细胞构建成功;CCK-8法和软琼脂克隆实验证实过表达CBL显著促进MM细胞增殖;Transwell迁移实验发现过表达CBL增强细胞迁移;ALDH法实验结果表明过表达CBL可以促进MM细胞干性增强,微流控芯片结果表明相较于对照细胞,过表达CBL的MM细胞在微流控芯片中的流出率明显增强,异种移植瘤动物模型实验表明过表达CBL可以促进MM体内生长.3.Co-IP/MS结果显示过表达CBL促进β-catenin入核增加,从而激活β-catenin信号通路;进一步研究分析,筛选出下游差异表达基因TJP2;WB结果表明CBL通过下调TJP2促进β-catenin入核增加而激活β-catenin通路.4.CBL抗体Co-IP实验和免疫荧光实验表明CBL与TJP2存在互作关系,并且CBL可以泛素化降解TJP2;WB结果显示过表达CBL增加泛素化降解TJP2并促进GSK3β本体磷酸化,进而降低GSK3β复合物对β-catenin的磷酸化作用,促进β-catenin表达和入核增多,进而激活β-catenin通路.
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