anti-Cyt℃hrome c抗体
anti-Cyt℃hrome c抗体是一类可以特异性结合人Cyt℃hrome c的多克隆抗体,主要用于检测人Cyt℃hrome c的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中人Cyt℃hrome c水平.用纯化的人Cyt℃hrome c抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人Cyt℃hrome c,再与HRP标记的人Cyt℃hrome c抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人Cyt℃hrome c呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人Cyt℃hrome c浓度.
📌 参考资料/链接：
Skeletal Muscle MnSOD,Mit℃hondrial Complex II,and SIRT3 Enzyme Activities Are Decreased in Maternal Obesity During Human Pregnancy and Gestational Diabetes Mellitus[J].Kristen E.Boyle,Sean A.Newsom,Rachel C.Janssen,Martha Lappas,Jacob E.Friedman.The Journal of Clinical End℃rinology&Metabolism.2013(10)
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用于Sirt3介导的COX乙酰化在氧化应激诱导细胞凋亡中的作用研究
多亚基的细胞色素c氧化酶(Cyt℃hrome c oxidase,COX)是线粒体呼吸链复合物IV,在电子传递过程中发挥重要作用.与氧化应激密切相关的老年退行性疾病和缺血/再灌注的细胞凋亡过程中均发现COX活性降低.但是目前并不清楚细胞凋亡是否与COX乙酰化状态升高有关.
据此,将考察Sirt3与COX乙酰化水平的关系,并进一步探讨其在氧化应激诱导的细胞凋亡中的作用.首先,研究Sirt3对COX乙酰化水平影响.采用30 m M Sirtuin家族抑制剂—尼克酰胺(nicotinic acid amide,NAM)作用于小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)3 h后,免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)观察Sirt3蛋白表达和COX乙酰化水平变化.
结果发现Sirt3蛋白表达明显减少,COX乙酰化水平显著增加.利用50 n M,100 n M si RNA干扰Sirt3后,利用紫外分光光度计检测COX的活性,根据IP分析COX亚基的乙酰化水平改变,WB检测凋亡相关蛋白.
结果也显示COX活性明显受到抑制,且COX的各亚基中COX-1乙酰化水平特异性升高,其余各亚基乙酰化水平变化不明显.此外,Cyt c释放到胞浆中增加,Caspase 3被激活,引起NIH/3T3细胞凋亡.
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