ADENYLOSUCCINATE LYASE腺苷酸琥珀酸裂解酶抗体是一类可以特异性结合ADENYLOSUCCINATE LYASE腺苷酸琥珀酸裂解酶的多克隆抗体,主要用于体外检测ADENYLOSUCCINATE LYASE腺苷酸琥珀酸裂解酶的WB,Elisa,IP,IF,IHC等免疫学实验. 腺嘌呤琥珀酸裂合酶参与嘌呤的从头合成和肌苷一磷酸形成一磷酸腺苷.对AMP生物合成中的两个反应进行催化:从琥珀酰氨基咪唑甲酰胺(SAICA)核糖肽中去除富马酸,得到氨基咪唑甲酰胺核糖肽(AICA),从腺苷酸中去除富马酸,得到AMP.腺苷酸琥珀酸酶缺乏可导致琥珀酸嘌呤自闭症,精神运动迟缓,在某些情况下还可导致与肌肉萎缩和癫痫相关的生长迟缓.两个编码不同亚型的转录变体已经被发现.
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用于弓形虫中腺苷酸琥珀酸裂解酶和腺苷酸激酶的生物学功能的研究
弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,在世界范围内广泛分布,不但危害人类的健康,也会对畜牧业造成巨大的经济损失.通常缓殖子和速殖子是弓形虫的两种表现形式,在中间宿主体内速殖子的快速繁殖会造成宿主的急性感染,严重时会表现为弓形虫眼病或者脑病.但在免疫系统正常的宿主中,弓形虫会以缓殖子的形式分化成为组织包囊,从而对所寄生的宿主造成长期的慢性感染.
核苷酸的合成对于弓形虫的生存至关重要,核苷酸代谢相关的大多数酶在弓形虫生长发育的各个阶段均有表达,其中参与弓形虫嘌呤核苷酸合成过程中的次黄嘌呤黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine-xanthine-guanine phosphoribosyl transferase,HXGPRT)因为与腺苷酸激酶(adenosine kinase,AK)存在功能的冗余而被作为药物靶标广泛应用于弓形虫的遗传操作中.除此之外在弓形虫嘌呤核苷酸代谢过程中还有许多的酶参与其中,且大部分的功能并不清楚.
研究选择了目前发现的在弓形虫中合成腺嘌呤核苷酸的两个酶:腺苷酸琥珀酸裂解酶(adenylosucccinate lyase,ADSL)和腺苷酸激酶(AK)进行遗传学和生物学功能的研究,以解析弓形虫核酸前体物质合成的分子机制.具体的工作包括以下几方面:(1)ADSL,AK敲除株的构建及功能研究利用CRISPR/CAS9基因编辑技术对弓形虫合成腺苷酸途径中的ADSL和AK两个基因分别进行单敲除和双敲除,对获得的敲除株进行一系列的表型实验,首先通过复制和空斑实验,证明了单敲除ADSL和AK后弓形虫的生长速度有所减慢,且双缺失虫株体外培养的生长缺陷更为明显.通过小鼠毒力实验证明了单敲除ADSL后弓形虫的毒力减弱和包囊形成数量减少,但高剂量的δADSL虫株感染ICR小鼠后其毒力与野生型无明显差异.相同条件下提高δADSLδAK虫株的感染剂量至10-5,被感染的小鼠无明显的临床症状且存活率为100%.荷虫量试验结果证明相比于δADSL和野生型ME49虫株,δADSLδAK虫株在体内存在繁殖缺陷.综上所述,ADSL,AK的缺失影响了弓形虫的生长发育.
(2)腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)缺失虫株可作为弓形虫的候选减毒活疫苗提供良好的免疫保护100个Me49δADSL速殖子感染ICR小鼠,结果显示弓形虫毒力减弱和包囊形成数量减少.本研究评估了Me49δADSL的免疫保护性,免疫δADSL的小鼠可以抵抗弓形虫Ⅰ(RH),Ⅱ(ME49),Ⅲ(VEG)型虫株的再次感染,并在感染的短期(30d)和长期(70d)均提供100%的免疫保护力.在免疫δADSL虫株的小鼠血清中可以检测到高水平的特异性Ig G抗体.
进一步的研究发现,免疫接种Me49δADSL后的小鼠分别在30d和70d收集血清,进行细胞因子的检测,结果证明免疫后的宿主会产生高水平的细胞因子INF-γ和IL-12.采集免疫150d的小鼠脾细胞体外培养后用弓形虫全虫抗原进行刺激后,产生了高水平的INF-γ和IL-12,细胞因子IL-12-INF-γ轴对于控制弓形虫的感染过程中起关键的作用.这些结果表明,Me49δADSL虫株诱导的免疫保护中,细胞免疫可能占主导作用.
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