CACO-2细胞专用培养基经过长期测试,可保持Caco-2细胞的生长状态.本产品中已包含Caco-2细胞生长所需的各种成分,无需添加任何成分,可直接用于Caco-2细胞的体外培养.产品仅供进一步科研使用,不得用于诊断,治疗,临床,家庭及其它用途. CACO-2细胞专用培养基成分;MEM＋20%FBS＋1%P/S.
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用于基于Caco-2细胞与小鼠肠道模型的微塑料生物毒性效应研究
通过体外实验和体内实验研究微塑料对肠道的影响.体外实验主要研究20,200 nm聚苯乙烯(Polystyrene,PS)对Caco-2细胞的毒性机制.体内实验方面,将过1000目筛的聚苯乙烯(PS),聚乙烯(polyethylene,PE),聚对苯二甲酸乙二醇酯(Polyethylene terephthalate,PET),聚氯乙烯(Polyvinyl chloride,PVC),尼龙66(Polyadiohexylenediamine,PA66)对C57BL/6小鼠进行灌胃,每种塑料设置两个剂量组(3,30 mg微塑料/kg体重),研究不同种类微塑料对小鼠血清脂代谢,肠道免疫以及肠道菌群变化的影响.
具体研究内容与结果如下:1.20 nm PS(PS20),200 nm PS(PS200)与Caco-2细胞共培养6 h后,PS20浓度为80µg/m L时细胞活力显著下降,PS200浓度在100µg/m L时微观察到细胞活力的显著变化.活性氧(ROS)水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放,谷胱甘肽(GSH)测定结果表明PS20和PS200对Caco-2细胞毒性影响呈浓度依赖性,并且PS20对细胞的影响大于PS200.通过免疫荧光实验观察到PS进入细胞的溶酶体,同时发现大量的PS20与线粒体发生共定位.应用JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位,结果显示PS20诱导细胞发生严重的线粒体膜电位去极化,致使细胞发生凋亡.流式细胞实验结果与线粒体膜电位检测结果一致,PS20浓度为20µg/m L的时候诱导细胞发生早期凋亡,PS20浓度达80µg/m L时诱导细胞发生晚期凋亡.
2. 选取6周周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分组后使用微塑料连续对小鼠灌胃4周.PET,PVC,PA66小鼠体重显著下降.PS,PE,PET,PVC,PA66处理对小鼠肝系数,肾系数,脾系数无显著影响,但引起了血清中总甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的代谢紊乱.
3. 基于宿主基因表达,分析回肠与结肠黏蛋白基因(MUC2,MUC3),微生物识别受体(TLR2,TLR4,NOD2),调节因子(Fox P3,GPR43),炎性细胞因子(IL-10)以及转化生长因子(TGF-β)的转录水平,以确定不同种类微塑料对肠道的影响.本研究所用的5种微塑料对回肠TLR2,TLR4,NOD2转录水平的下调作用普遍大于结肠.各实验组处理后出现的Fox P3,IL-10,TGF-β转录水平下调说明微塑料具有损伤肠道免疫功能的潜力.
4.通过16S rRNA高通量测序,研究不同种类微塑料对小鼠肠道菌群的影响.结果表明,PS,PE,PET,PVC,PA66改变了小鼠肠道微生物的Alpha多样性与Beta多样性,显著降低了乳杆菌属的相对丰度.灌胃时间达4周后,小鼠肠道中厚壁菌门的相对丰度显著降低.在种水平上,高剂量PS,PET,PVC,PA66组显著增加了Akkermansia＿muciniphila的相对丰度.
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