ACHN人肾细胞腺癌细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞.此细胞包含并表达转染的Ad5基因.早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA.经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2.该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主.
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用于Micro RNA靶向Wnt信号通路抑制肾细胞癌增殖和侵袭作用机制的研究
miR-384联合miR-613对肾细胞癌细胞ACHN的影响联合miR-384模拟物和miR-613模拟物,观察ACHN的增殖率;Transwell Invasion Assay法检测ACHN细胞侵袭能力;Western Bolt观察Wnt活性的改变.
结果:在肾细胞癌中miRNA-384靶向AEG-1的研究1.RT-q PCR结果显示:与癌旁肾组织相比,肾癌组织中miR-384的水平显著降低(P<0.01).与肾微管上皮细胞株相比,在肾细胞癌细胞ACHN,A-498,786-O和Caki-1中,miR-384的水平显著降低(P<0.01).
在ACHN和Caki-1细胞中应用miR-384模拟物和miR-384抑制剂后,RT-q PCR结果显示:与miR NC组相比,miR-384模拟物组的miR-384水平显著增高(P<0.01).miR-384抑制剂组的miR-384水平降低(P<0.05);
CCK8结果显示:与miR NC组相比,miR-384模拟物组细胞增殖率降低(P<0.05).miR-384抑制剂组细胞增殖率增高(P<0.05);细胞克隆实验和细胞侵袭实验结果显示:与miR NC组相比,miR-384模拟物组细胞数目降低(P<0.05).miR-384抑制剂组细胞数目增高(P<0.05);
2. 生物信息学分析miR-384是否靶向AEG1的3’-UTR,荧光素酶报告基因结果证实野生型的AEG1 3’-UTR可以直接靶向miR-384,在野生型AEG1 3’-UTR的miR-384模拟物组的荧光强度降低(P<0.05),而miR-384抑制剂组中荧光强度增强(P<0.05).RT-q PCR检测肾癌组织中AEG1 m RNA的表达水平,发现与癌旁组织相比,肾癌组织中AEG1 m RNA的水平显著增加(P<0.01).
RTq PCR和Western Blot结果显示:与miR NC组相比,miR-384模拟物组中AEG1的表达水平降低(P<0.05),而在miR-384抑制剂组中AEG1的表达水平增加(P<0.05).
荧光素酶报告基因结果显示:与miR NC组相比,miR-384模拟物组Wnt活性降低,而在miR-384抑制剂组中Wnt活性增高(P<0.05).3.过表达AEG-1后,与miR-384模拟物组相比,miR-384 mimics+AEG-1组Wnt活性增加(P<0.05);
CCK8结果显示:与miR-384模拟物组相比,miR-384mimics+AEG-1组细胞增殖率增加(P<0.05);细胞侵袭实验结果显示:与miR-384模拟物组相比,miR-384 mimics+AEG-1组细胞侵袭能力增加(P<0.05);
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