CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系是一种来源于人舌鳞癌组织的贴壁细胞系.这种细胞系在培养过程中能够保持其生物学特性,并可用于研究人舌鳞癌的发生,发展,治疗和药物筛选等方面的实验. CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系的保存条件通常为低温避光,并且需要在高纯度的条件下进行培养.这种细胞系具有一定的异质性,可以作为研究其他肿瘤细胞的模型之一.
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CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系可以用于辛伐他汀通过钙激活氯通道TMEM16A抑制口腔鳞状细胞癌增殖的机制研究
通过一系列的实验验证TMEM16A在口腔鳞癌中的表达和临床意义,研究TMEM16A对口腔鳞癌细胞增殖的影响,以及辛伐他汀对口腔鳞癌细胞增殖的影响及其作用机制.
研究方法:通过对TCGA数据库中305例口腔鳞癌标本和30例癌旁组织标本的临床数据和TMEM16A m RNA表达数据进行生物信息学分析,对GEO数据库中40对口腔鳞癌标本和癌旁组织标本的TMEM16A m RNA表达数据进行生物信息学分析.对84例口腔鳞癌组织切片及12例正常口腔黏膜组织切片的免疫组织化学染色分析并结合患者的临床资料,来研究TMEM16A在口腔鳞癌组织与非癌组织中的表达差异及其与口腔鳞癌患者各项临床指标的关系.
通过全细胞膜片钳技术验证TMEM16A在CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中是否介导钙激活氯电流.通过CCK-8实验分别研究敲低TMEM16A,TMEM16A抑制剂,过表达TMEM16A对口腔鳞癌细胞增殖的影响.通过全细胞膜片钳技术研究不同浓度的辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中TMEM16A通道功能的影响.通过Western blot实验研究辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中TMEM16A蛋白表达量的影响.通过CCK-8实验研究辛伐他汀对口腔鳞癌细胞CAL-27,CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系和人永生化表皮细胞Ha Ca T细胞增殖的影响.
通过CCK-8实验研究不同浓度的辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞增殖的影响以及加入过量MVA,敲低TMEM16A或过表达TMEM16A对辛伐他汀增殖抑制作用的影响.结果:数据库生物信息学分析结果表明,口腔鳞癌组织中TMEM16A m RNA的表达量显著高于癌旁组织.TMEM16A m RNA的表达量与口腔鳞癌患者的肿瘤大小,淋巴结转移,临床分期显著相关.T3与T4分期,N1-N3分期,临床分期Ⅲ期及Ⅳ期的口腔鳞癌患者中TMEM16A m RNA的表达量分别高于T1与T2分期,N0分期,临床分期Ⅰ期及Ⅱ期的口腔鳞癌患者.Kaplan-Meier生存分析结果表明,TMEM16A m RNA高表达的口腔鳞癌患者的总生存时间显著低于TMEM16A m RNA低表达的患者.
免疫组织化学染色结果表明,口腔鳞癌组织中TMEM16A蛋白的表达量显著高于正常口腔黏膜组织.TMEM16A蛋白的表达量与口腔鳞癌患者的肿瘤大小,淋巴结转移,临床分期显著相关.T3与T4分期,N1-N3分期,临床分期Ⅲ期及Ⅳ期的口腔鳞癌患者中TMEM16A蛋白的表达量分别高于T1与T2分期,N0分期,临床分期Ⅰ期及Ⅱ期的口腔鳞癌患者.Kaplan-Meier生存分析结果表明,TMEM16A蛋白高表达的口腔鳞癌患者的总生存时间显著低于TMEM16A蛋白低表达的患者.TMEM16A在CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系中介导钙激活氯电流.TMEM16A的敲低,TMEM16A的抑制剂T16Ainh-A01(20µM)可以显著抑制CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖.TMEM16A过表达可以显著促进口腔鳞癌细胞CAL-27的增殖.
辛伐他汀可以显著抑制CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中的钙激活氯电流,且抑制效果呈现剂量依赖性.辛伐他汀的IC50为5.605±1.512µM.此外,辛伐他汀(10µM)对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞中TMEM16A的蛋白表达水平没有显著的影响.辛伐他汀(10µM)可以显著的抑制口腔鳞癌细胞CAL-27和CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系的细胞增殖,对Ha Ca T细胞的增殖没有显著的影响.辛伐他汀(10µM)对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖性.加入过量的MVA(500µM)可以显著减少辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖抑制作用.TMEM16A的敲低可以显著减少辛伐他汀对CAL-33人舌磷癌贴壁细胞系细胞的增殖抑制作用.TMEM16A过表达可以显著的提高辛伐他汀对CAL-27细胞的增殖抑制作用.
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