BY4741感受态细胞

BY4741感受态细胞可用于跨膜区突变对ABC转运蛋白Pdr5p功能的影响及其机制研究:
真菌感染在临床上能导致高致死率,在艾滋病病人和接受器官移植或者进行化疗的免疫缺陷群体中更为明显.抗真菌药物的长期使用可能导致药物耐受和治疗失败.以致病微生物为对象研究药物抗性产生的机制对于解决日益严重的耐药问题非常重要.致病酿酒酵母菌株YJM789具有许多与致病性相关的表型.
在本研究中,使用通过全基因组铺瓦芯片进行基因分型的四分体分离子库对导致酿酒酵母BY4741(实验室菌株)与YJM789菌株氟康唑抗性差异的基因进行遗传定位,结果显示YJM789中PDR5基因序列的巨大变异是导致其对氟康唑高度敏感的关键因素.PDR5基因编码一个外排泵,它通过外排大量结构差异很大的毒性化合物赋予细胞多药物抗性.使用GFP分别标记了BY4741与YJM789中的PDR5,荧光显微镜观察表明YJM789中Pdr5p-GFP融合蛋白定位于细胞膜,且过表达YJM789PDR5无法回补BY4741pdr5缺失株的抗药表型.
这些结果说明在YJM789中由Pdr5p所介导的唑类药物抗性下降不是由于Pdr5p错误定位或表达下调而是由Pdr5p功能受损所引起.在药物琼脂平板及液体培养液中比较了YJM789与BY4741对唑类及多烯类抗真菌药物的抗性,结果表明虽然YJM789中PDR5突变导致其对氟康唑外排能力严重受损,但同样的突变却赋予细胞在多烯抗生素下生长的优势.
为研究序列变异对YJM789Pdr5p功能的影响,通过片段替换的方法将划分的BY4741PDR5片段替换为YJM789PDR5的相应片段,构建了一序列PDR5嵌合表达载体.通过使用氟康唑与放线菌酮抗性实验评估各Pdr5p嵌合体的外排功能,同时研究其表达,亚细胞定位,ATPase活性以及罗丹明6G外排效率等特性,结果显示位于预测的连接第十与第十一跨膜螺旋胞内环内1352位点由丙氨酸到甲硫氨酸的突变可导致Pdr5p药物外排能力严重下降,且其影响程度与突变残基的大小相关.
联系我们可以获取更多内容.
如有产品相关项目调研或推广服务, 请致函联系我们