CACO-2 人结直肠腺癌细胞

用于miRNA-214和miRNA-10a在结直肠腺癌中的表达,临床意义及其功能研究
探讨miR-214和miR-10a作为肿瘤标记物对结直肠腺癌的诊断价值,进一步阐明miR-214在结肠肿瘤发生发展过程中的作用机制,为深入了解结直肠腺癌发病及防治机制提供理论依据.
方法:1收集结直肠腺癌患者新鲜组织标本共44例,包括结直肠腺癌肿瘤组织和相应切缘无瘤粘膜组织.
2应用茎环逆转录荧光定量PCR方法检测结直肠腺癌组织和切缘无瘤粘膜组织中miR-214和miR-10a的表达水平,比较两组间表达差异,分析miR-214和miR-10a的表达与结直肠腺癌患者临床病理特征的关系.
3选取9种结肠癌细胞(SW620,SW480,SW1116,HT29,DLD1,LOVO,Caco-2,HCT116p53+/+,HCT116p53-/-)进行细胞培养.
4应用茎环逆转录荧光定量PCR方法检测结肠癌细胞中miR-214和miR-10a的表达水平,比较HCT116p53+/+细胞和HCT116p53-/-细胞中二者的表达差异,分析其与p53基因的关系.
5对HCT116和SW1116两种细胞进行miR-214转染,实验组转染miR-214模拟物,对照组转染阴性对照物,同时设置空白组未做转染处理.
6通过平板克隆形成实验观察细胞转染后HCT116细胞和SW1116细胞克隆形成情况,比较空白组,对照组和转染miR-214组间的差异.
7HCT116细胞和SW1116细胞中进行细胞转染后12h,24h,36h,48h,60h,分别应用MTT比色分析法检测5个时段的OD值,绘制细胞生长曲线,分析空白组,对照组和转染miR-214组间细胞增殖改变情况.
8应用流式细胞技术检测细胞转染后HCT116细胞凋亡情况,比较空白组,对照组和转染miR-214组间的差异.
应用spss13.0软件对数据进行统计分析,数据以中位数(四分位数间距)或均数±标准差表示,两组间配对样本采用Wilcoxon检验或配对t检验,两组间独立样本采用Mann-Whitney检验,重复测量数据采用双因素方差分析,均以P<0.05为差异有统计学意义.
结果:1 miRNA-214和miRNA-10a在结直肠腺癌组织,相应切缘无瘤粘膜中的表达miR-214在44例结直肠腺癌组织和相应切缘无瘤粘膜中的表达水平分别为0.0264(0.0063,0.0591)和0.0505(0.0250,0.1121),结直肠腺癌组织中表达水平明显低于切缘无瘤粘膜组织,差异有统计学意义(Z=-2.591,P=0.0097);miR-10a在44例结直肠腺癌组织和相应切缘无瘤粘膜中的表达水平分别为0.1108(0.0371,0.3482)和0.1841(0.0962,0.3243),结直肠腺癌组织中表达水平明显低于切缘无瘤粘膜组织,差异有统计学意义(Z=-2.486,P=0.0131).
2 miR-214和miR-10a的表达与结直肠腺癌临床病理特征的关系miR-214和miR-10a的表达水平均与结直肠腺癌患者的组织学分型密切相关,即非粘液癌中的表达水平显著高于粘液癌(P=0.0138,P=0.0224),而与性别,年龄,部位,浸润深度,分化程度,淋巴结转移和临床分期无关(均P>0.05).
3 miRNA-214和miRNA-10a在结肠癌细胞中的表达miR-214和miR-10a在结肠癌细胞SW620,SW480,SW1116,HT29,DLD1,LOVO和Caco-2中的表达均明显低于切缘无瘤粘膜组织.
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