BAX(小鼠来源抗体)
BAX(小鼠来源抗体)以人工合成的Bax氨基端(Amino-terminal)的一段多肽为抗原制备而成的抗Bax小鼠单克隆抗体.克隆号为6A7(Clone6A7),是应用最广的Bax抗体.抗体类型为Mouse IgG1. 本Bax抗体可以检测内源性水平的Bax,未发现和其它Bcl-2家族蛋白有交叉反应.Bax是一种促凋亡蛋白,上调Bax蛋白水平可以促进细胞凋亡.在通过线粒体应激诱导的细胞凋亡中Bax起关键作用.
📌 参考资料/链接：
Loss of Cbl–PI3K Interaction Enhances Oste℃last Survival due to p21‐Ras Mediated PI3K Activation Independent of Cbl‐b[J].Naga Suresh Adapala,Mary F.Barbe,Alexander Y.Tsygankov,Joseph A.Lorenzo,Archana Sanjay.J.Cell.Bi℃hem..2014(7)
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用于胰岛素受体底物1通过PI3K/Akt通路下调大鼠成骨细胞NFκB和BAX表达促进成骨细胞增殖研究
Bcl2(B-cell lymphoma2,Bcl2)家族长久以来被认为是凋亡主要调节机制,其中Bcl2抑制凋亡,BAX促进凋亡,二者独立调节凋亡.研究发现糖尿病大鼠凋亡显著增加.糖尿病时,高糖环境引起细胞损伤,BAX激活和引起其他促凋亡蛋白如细胞色素C释放.1型糖尿病小鼠骨中成骨细胞凋亡增加.一些研究表明IRS1具有抗凋亡能力,IRS1可通过调节Bcl2调控凋亡.研究组前期试验显示2型糖尿病合并骨质疏松症的发病可能与骨组织IGF1,IRS1,IRS2表达受抑制有关,同时可能与骨组织PI3K,Akt表达降低,NFκB表达升高有关.
方法:1提取Wister大鼠肝脏RNA,逆转录生成cDNA.根据NCBI提供的IRS1基因编码序列,委托DNA合成公司合成带适当酶切位点的引物,以cDNA作为模板合成IRS1,插入pEGFP-N1质粒,获得过表达IRS1的表达载体.体外转染人Hela细胞.
2酶消化联合组织块法体外培养Wister大鼠成骨细胞,倒置显微镜下观察成骨细胞形态,传代至第二代时茜素红染色鉴定成骨细胞.传代至第二代时pEGFP-N1-IRS1表达载体脂质体法LipofectamineTM2000瞬时转染成骨细胞,同时应用PI3K激酶特异性抑制剂LY294002阻断PI3K/Akt通路,免疫荧光和Western blotting法观察成骨细胞NFκB表达变化.
3酶消化联合组织块法体外培养Wister大鼠成骨细胞,传代至第二代时pEGFP-N1-IRS1脂质体法LipofectamineTM2000瞬时转染成骨细胞,同时应用LY294002阻断PI3K/Akt通路,观察成骨细胞IRS1/PI3K/Akt通路及BAX的表达变化.同时检测成骨细胞细胞周期.
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