AtT20是一种来源于小鼠垂体腺瘤的细胞系,常用于研究垂体腺瘤的生物学特性,药物筛选和治疗策略.该细胞系具有以下特点: 来源:AtT20细胞系来源于小鼠垂体腺瘤组织,经过多次传代和筛选,形成了一个相对稳定的细胞系. 形态特征:AtT20细胞呈多边形或长条形,大小约为15-30微米,胞质丰富,核大而圆,核仁明显. 生长特性:AtT20细胞生长迅速,传代周期约为24-48小时,可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长. 激素分泌特性:AtT20细胞具有垂体腺瘤的典型激素分泌特性,如生长激素,促甲状腺激素等,可用于研究垂体腺瘤相关的激素分泌异常. 其他特性:AtT20细胞还具有一定的增殖能力,可用作研究垂体腺瘤细胞增殖相关疾病的模型.
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AtT20可以用于丙戊酸钠联合替莫唑胺对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1凋亡的促进作用及其机制研究
探讨替莫唑胺联合丙戊酸钠对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1增殖的抑制作用以及凋亡的促进作用,并探讨其可能的分子机制.
[方法]1.细胞培养:小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM/High Glucose培养基中,放置于37℃,5%CO2的细胞培养箱中培养,视细胞生长状态,间隔约1-2天半量换液一次,3天左右1:3传代一次.取对数生长期的细胞进行实验.
2. TMZ与VPA对AtT20,GT1-1细胞增殖的影响.取对数生长期的AtT20,GT1-1细胞,将细胞分为(1)AtT20细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2mM)TMZ,并分别培养24,48,72h;(2)AtT20细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度(2,4,8,16,32,64mM)VPA,并分别培养24,48,72h;(3)GT1-1细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度TMZ(浓度同前),并分别培养24,48,72h;(4)GT1-1细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度VPA(浓度同前),并分别培养24,48,72h,通过CCK-8法检测TMZ与VPA各自对AtT20,GT1-1细胞增殖的影响.
3. TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1细胞活性的影响.取对数生长期的AtT20,GT1-1细胞,将细胞分为(1)对照组(加入等量完全培养基);(2)TMZ组(加入1.6mMTMZ);(3)VPA组(加入16mMVPA);(4)TMZ+VPA组(加入1.6mM TMZ以及加入16mM VPA).药物处理72h后,通过LDH法检测TMZ与VPA联合应用对AtT20,GT1-1细胞活性的影响.
4.TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1细胞凋亡的影响.取对数生长期的AtT20,GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基,TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过TUNEL染色,流式细胞计数检测TMZ与VPA联合应用对AtT20,GT1-1细胞凋亡的影响;通过Hoechst 33258染色检测TMZ与VPA联合应用对AtT20,GT1-1细胞形态学的影响.
5.TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1细胞凋亡影响的分子机制.取对数生长期的AtT20,GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基,TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过Western blot检测TMZ与VPA联合应用对AtT20,GT1-1细胞cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9,Bax,Bcl-2,AIF,cleaved PARP,p53等凋亡相关蛋白表达水平的影响.
[结果]1.TMZ与VPA对AtT20,GT1-1细胞增殖的影响.CCK-8法检测结果显示:TMZ,VPA分别作用于AtT20,GT1-1细胞后,细胞增殖与对照组相比明显抑制且具有统计学意义(p<0.05),TMZ,VPA对细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性与时间依赖性.
2.TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1细胞活性的影响.LDH法检测结果显示:TMZ,VPA分别作用于AtT20,GT1-1细胞后,细胞活性与对照组相比明显降低且具有统计学意义(p<0.05),TMZ与VPA联合应用后细胞活性进一步降低,结果具有统计学意义(p<0.05).
3.TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20,GT1-1细胞凋亡的影响.TUNEL染色,流式细胞计数结果显示:TMZ,VPA分别作用于AtT20,GT1-1细胞后,细胞凋亡水平与对照组相比显著升高,结果具有统计学意义(p<0.05)TMZ与VPA联合应用后细胞凋亡水平进一步升高,结果具有统计学意义(p<0.05).Hoechst 33258染色结果显示:TMZ,VPA分别作用于AtT20,GT1-1细胞后,表现为均匀弥散染色的细胞核(活细胞核)数量减少,浓染致密的颗粒块状荧光(凋亡细胞核)数量增多,细胞凋亡水平与对照组相比显著升高,TMZ与VPA联合应用后凋亡水平进一步升高.
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