AEC 显色试剂盒
AEC显色试剂盒适用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色,如EliVision,MaxVision和SP法等. AEC即3-氨基-9-乙基卡唑(3-amino-9-ethylcarbozole),是过氧化物酶(peroxidase)的生色底物,在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累,形成红色不溶性产物.红色不溶性产物在有机溶剂中会溶解,是HRP结合物常用的底物,在Western Blot,免疫组织化学中应用比较广泛.
📌 参考资料/链接：
Lack of mutagenicity of acrolein-induced DNA adducts in mouse and human cells.[J].Kim Sang-in,Pfeifer Gerd P,Besaratinia Ahmad.Cancer research.2007(24)
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用于维甲酸对丙烯醛作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响研究
建立原代大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的分离,纯化及原代培养的方法,探索丙烯醛对AECⅡ细胞周期的影响,同时观察维生素A酸(RA)能否拮抗丙烯醛对AECⅡ的损伤作用.
方法用4.2u/ml的弹性蛋白酶溶液通过气管插管注入肺泡内,消化分离AECⅡ.把细胞悬液接种到包被有大鼠IgG的塑料平皿中纯化细胞.用倒置显微镜观察细胞生长状况,用电镜,碱性磷酸酶显色法(BCIP/NBT),改良巴氏染色法,单宁酸染色法,免疫组化染色法鉴定AECⅡ并计算细胞纯度.
用MTT法检测丙烯醛对AECⅡ活力的影响,流式细胞仪检测在丙烯醛及RA作用下AECⅡ细胞周期的变化.
运用反转录定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测P21,P53在mRNA水平的变化.结果分离所得AECⅡ纯度达到90%以上,倒置显微镜下可见细胞呈岛屿状生长,胞浆内可见大量黑色颗粒.
电镜下可见细胞内有大量板层小体,其中有些板层小体呈空泡状结构,细胞膜上有绒毛装结构.BCIP/NBT染色可见胞浆内有蓝色颗粒.改良巴氏染色法,单宁酸染色法可见胞浆内有黑色颗粒.
抗大鼠肺泡表面活性物质A(SP-A)免疫组化染色呈阳性反应.在丙烯醛作用下,AECⅡ细胞生长明显受到抑制,流式细胞仪检测结果显示,丙烯醛作用下细胞周期被阻滞在G1期,RA对丙烯醛的拮抗作用不明显.RT-qPCR检测结果显示,和对照组相比,丙烯醛作用后P21mRNA表达在其他各组均明显下调,且各干预组之间P21mRNA表达没有明显差异;P53基因表达在对照组和各干预组之间没有明显差异.
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