2',7'-二氯荧光素二乙酸酯,外观为,可溶于水和一些有机溶剂,如DMSO.它是一种常用的荧光探针,广泛应用于检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)特别是过氧化氢(H₂O₂)的生成.
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将5-氨基-BAPTA 四甲酯(1.0g,1.82mmoles)溶解在15mL CH2Cl2中以得到澄清溶液.在10分钟内将羧基-2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的混合酸酐溶液(1.15 g溶于5 mL CH2 Cl2中)滴加到搅拌中的胺溶液中.反应在室温下搅拌过夜.第二天的TLC(在EtOAc中)显示转化为新产品,在暴露于氨蒸气时产生有色荧光产品(Rf=0.25,酸酐Rf=0.9).产物在填充有200 mL 35-70µ硅胶的柱上分离,用1:1:1 CHCl3:己烷:EtOAc洗脱.在30℃下蒸发纯馏分,得到1.35 g(1.27毫摩尔;70.1%收率)纯2',7'-二氯荧光素二乙酸酯BAPTA四甲酯.CDCl3中的NMR显示:2.4ppm,s 6H;3.6ppm,s 12H;4.15ppm,s 8H;4.2-4.35ppm,d 4H;6.8 ppm,m7H;7.3-7.4 ppm,m 4H;8.3 ppm,d 1 H;8.6 ppm,d 2H.
2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的合成
将4-二甲氨基吡啶(15µmol,0.1当量)和吡啶(0.33 mmol,2.2当量)加入2′,7′-二氯荧光素(0.15 mmol,1当量)和二氯甲烷(2.0 mL)中;滴加酰氯(0.33 mmol,2.2 eq),搅拌所得溶液1小时;用水稀释,用二氯甲烷萃取,用饱和氯化铵水溶液和饱和盐水洗涤有机相,用无水硫酸镁干燥有机相,抽滤,减压除去溶剂;用少量二氯甲烷完全溶解残余物,加入约等于残余物体积的中性二氧化硅粉末,充分搅拌后,真空除去溶剂,得到粗产物-硅胶粉末,然后将其干燥装入柱中;通过硅胶柱色谱法(环己烷:乙酸乙酯=10:4,体积比)纯化产物2',7'-二氯荧光素二乙酸酯.
2',7'-二氯荧光素二乙酸酯的合成2
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