Anti-c-Myc tag抗体(HRP)
Anti-c-Myc tag抗体(HRP)是一类可以特异性结合c-Myc tag的多克隆抗体,主要用于检测c-Myc tag的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中c-Myc tag水平.用纯化的c-Myc tag抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-Myc tag,再与HRP标记的c-Myc tag抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的c-Myc tag呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中c-Myc tag浓度.
📌 参考资料/链接：
Kamibayashi,C,Serrano,M.Prives,C,Mumby,M.C.Beach,D.(1996)p53-dependent ass℃iation between cyclin G and the B’subunit of protein phosphatase 2A.Okamoto,K.Molecular and Cellular Biology.
📄 详细内容
用于周期蛋白G2结合蛋白的筛选及初步功能研究
周期蛋白G2由定位于染色体4q21.21的CCNG2基因编码,N端有典型的周期蛋白框序列,C端含PEST基序.周期蛋白G2在小脑,胸腺,脾,前列腺和肾脏中表达较高,在细胞中主要分布于细胞质.周期蛋白G2的mRNA表达水平随细胞周期波动,表现为在晚S期最高,而在G2／M期开始降低.
研究显示,周期蛋白G2在HEK293和CHO(Chinese hamster ovary)细胞中瞬时表达可导致G1期停滞;进一步发现,周期蛋白G2的细胞生长抑制作用与周期蛋白G2-蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)复合物密切相关.
构建了周期蛋白G2与GAL4-BD的融合蛋白的表达载体,以周期蛋白G2为诱饵,应用MATCHMAKER GAL4 Two-Hybrid System 3,筛选预转入酵母Y187的人胎脑cDNA文库(Pretransformed MATCHMAKER Human Fetal Brain cDNA Library).选择58个克隆进行序列分析,结果表明它们代表35种不同cDNA,其中PPP2R5B(Homo sapiens protein phosphatase 2,regulatory subunit B(B56),beta isoform)是已经报道过的与周期蛋白G2结合的PP2A的B56β.
另外,有三种cDNA在阳性克隆中出现的重复次数较多,即有8个克隆为DAPPER1 cDNA,3个克隆为BPY2IP1 cDNA以及3个克隆为Clorfl87 cDNA.
为了验证DAPPER1,BPY2IP1和Clorfl87与周期蛋白G2的结合,构建了真核表达载体pCMV-Tag5A-DAPPER1,pCMV-Tag5C-BPY2IP1和pCMV-Tag5B-Clorfl87,与p3×Flag-7.1-G2共转染HEK293细胞,以结合有c-myc标签抗体的琼脂糖树脂(Anti-c-Myc Agarose conjugate)沉淀与DAPPER1,BPY2IP1和Clorfl87结合的复合物.样品经SDS-PAGE分离后用Flag单抗进行Western Blot检测.
联系我们可以获取更多内容.
如有产品相关项目调研或推广服务, 请致函联系我们