AMPK1抗体

AMPK1抗体可以用于左,右归丸对AMPK/mTOR介导的PMOP大鼠糖,脂代谢及能量代谢的实验研究
研究从中医学“阴阳互济”的理论出发,选用张景岳创立滋补肾阴的代表方剂左归丸和温补肾阳的代表方剂右归丸,通过研究左,右归丸对PMOP模型大鼠糖,脂代谢和能量代谢的影响,以及左,右归丸基于AMPK1抗体AMPK/m TOR信号通路对PMOP模型大鼠糖,脂代谢紊乱和能量代谢紊乱的防治作用,为“阴阳互济”理论指导防治PMOP女性绝经后代谢紊乱提供实验依据.
材料与方法:本实验选取SPF级2月龄雌性未生育SD大鼠60只,体重在200220g,按照体重随机分层为空白组(KB)8只,假手术组(SHAM)8只,去卵巢模型组44只.去卵巢模型组采用双侧背部卵巢切除术制备模型,假手术组只切除卵巢周围与卵巢等大的部分脂肪组织,而空白组(KB)则不做任何处理.术后1周,因双侧背部卵巢切除术死亡的大鼠有4只,将成活的40只大鼠再次按体重随机分为去卵巢模型组(OVX),左归丸组(ZGW),右归丸组(YGW),补佳乐组(BJL),与原来的空白组(KB)和假手术组(SHAM)共计6组.各治疗组灌胃对应药物,KB组,SHAM组,OVX组灌胃蒸馏水.经过12周给药治疗后,剔除死亡大鼠和不符合纳入标准的大鼠8只.
本实验共计纳入实验大鼠48只,每组各8只.各组大鼠在麻醉状态下进行左侧股骨骨密度检测,并采用剪尾取血的方法进行糖耐量检测.取材前24h禁食不禁水,末次给药2h后称重,并按0.3m L·100g-1的标准为各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液进行麻醉.待大鼠麻醉后进行腹主动脉取血,取得的血液静置2h后按2000r/min*20min来进行离心,将离心提取的血清分装于无菌EP管并置于﹣80℃冻存,待用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇,甘油三酯,低密度脂蛋白胆固醇,高密度脂蛋白胆固醇,谷丙转氨酶,谷草转氨酶;取大鼠左侧后肢胫骨近端1/3部分,仔细剥离胫骨附着的肌肉筋膜及结缔组织,固定并脱钙数周后制作石蜡切片,用于形态学HE检测;取大鼠新鲜肝脏后称量湿重,用于统计大鼠肝脏指数,再将肝脏前叶装于无菌EP管并置于﹣80℃冻存,用于形态学HE检测;取大鼠肩胛部棕色脂肪组织及腹后壁脂肪组织称量湿重,用于统计大鼠肩胛部棕色脂肪指数和腹后壁脂肪指数,并将肩胛部棕色脂肪组织置于4%多聚甲醛固定,用于形态学HE检测,将腹后壁脂肪组织装于无菌EP管并置于﹣80℃冻存,采用AMPK1抗体蛋白印迹法(WB)检测大鼠腹后壁脂肪组织AMPKα1,m-TORC1,p70S6k1的蛋白磷酸化表达情况,C/EBPα,C/EBPβ,TSC2,Rheb,4EBP1的蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠腹后壁脂肪组织AMPKα1,m-TORC1的基因表达情况;采用高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠腹后壁脂肪组织中ATP含量.
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