1号染色体开放阅读框180抗体
1号染色体开放阅读框180抗体是一类可以特异性结合1号染色体开放阅读框180的多克隆抗体,主要用于体外检测1号染色体开放阅读框180的WB,Elisa,IP,IF,IHC等免疫学实验. 1号染色体是人类的染色体,横跨约2.6亿个碱基对,占人类基因组的8%.1号染色体如同其他的体染色体,一般人类身体内的细胞中,会有两条1号染色体.该染色体是人类基因组计划最后完成测序的染色体. 1号染色体上有大约3000个基因,考虑到基因的巨大数量,也有大量的疾病与1号染色体有关.值得注意的是,罕见的衰老疾病Hutchinson-Gilford progeria与编码层积物A的LMNA基因有关.当有缺陷时,LMNA基因的产物可以在细胞核中堆积,并导致特征性的核出血.
📌 参考资料/链接：
Hepat℃yte-stellate cell cross-talk in the liver engenders a permissive inflammatory microenvironment that drives progression in hepat℃ellular carcinoma.[J].Coulouarn Cédric,Corlu Anne,Glaise Denise,Guénon Isabelle,Thorgeirsson Snorri S,Clément Bruno.Cancer research.2012(10)
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用于反式剪接成熟人ACAT1 mRNA的翻译产物与可选择性起始翻译机制研究
着重对反式剪接人ACAT1 mRNA的翻译及其分子机制进行深入的探索研究.
首先,将全长ACAT1 cDNA K1转染AC29细胞,再利用ACAT1特异抗体DM10进行Western blot分析,不仅检测到50 kDa,而且还有56 kDa这两种不溶性ACAT1蛋白的表达.进而,一系列5’缺失的ACAT1 cDNA K1转染AC29细胞的研究表明,50 kDa ACAT1蛋白的表达只需要1号染色体来源的ACAT1 cDNA K1序列,而56 kDa ACAT1蛋白的表达则需要两条染色体来源的ACAT1 cDNA K1序列.
进一步,利用3’截短了的人ACAT1 cDNA K1序列(1-1786)进行同样的一系列5’缺失和转染细胞实验,研究结果显示在转染的各种细胞中均有17和25 kDa两种不同,17 kDaACAT1-NTP与50 kDaACAT1小蛋白对应,它的表达只需要1号染色体来源的3’截短型ACAT1 cDNAK1序列;而25 kDaACAT1-NTP与56 kDa ACAT1大蛋白对应,其表达则需要7号和1号两条染色体来源的3’截短型ACAT1 cDNA K1序列.上述研究直接证实,人ACAT1大蛋白(56/25 kDa)的表达需要7号和1号两条不同染色体来源的ACAT1 cDNA K1序列,而人ACAT1小蛋白(50/17 kDa)的表达只需要1号染色体来源的ACAT1 cDNA K1序列.
这些结果也说明,50和56 kDa ACAT1蛋白的大小差异是位于它们的N端区域.进而,利用特异识别人ACAT1 cDNA K1 ORF起始密码子AUG上游的同阅读框编码氨基酸序列的一种新制备抗体DM58,结合识别cDNA K1 ORF起始密码子AUG下游编码氨基酸序列的原有ACAT1特异抗体DM10,对转染表达的ACAT1蛋白进行深入的探索研究.
实验结果证实,人50和56 kDa ACAT1蛋白的N端区域引起它们之间的大小差异,是由于ACAT1大蛋白(56/25 kDa)比ACAT1小蛋白(50/17 kDa)多出一段N端氨基酸序列.进一步测定这两种不同,50 kDaACAT1具有较高的酶活性,56 kDaACAT1具有较低的酶活性,但均比50和56 kDaACAT1蛋白2共表达的酶活性高,其中50 kDa ACAT1蛋白酶活性比共表达酶的活性高3倍左右.而免疫双荧光染色和免疫电镜实验研究结果显示,这两种ACAT1蛋白具有相同的亚细胞定位,即定位于细胞内质网膜.
这些表明,50和56 kDa两种ACAT1蛋白的酶活性存在非常显著差异,而它们共表达的酶活性远远低于50 kDa ACAT1蛋白酶活性,则提示56 kDa ACAT1蛋白可调控细胞内ACAT1合成胆固醇酯的活性.最重要的是,利用Western blot和免疫组织化学方法,在佛波酯(PMA)诱导分化成熟的人单核/巨噬细胞系(THP-1)中检测到了内源表达的两种ACAT1蛋白,其中56 kDaACAT1蛋白的表达量随着PMA诱导时间的延长而非常显著增加;同时,人心脏组织和人原代培养的平滑肌细胞中同样存在内源表达的56 kDaACAT1蛋白.
上述研究首次揭示了反式剪接成熟ACAT1 mRNA在人组织细胞内可翻译产生一种新的异构体酶(56 kDa ACAT1蛋白),这既是深入研究罕见的人基因表达通过跨染色体的反式剪接及其机制的重要依据,也为进行反式剪接成熟mRNA及其可选择性翻译产生两种ACAT1蛋白调控体内组织细胞的胆固醇代谢功能等探索研究提供了重要线索.
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