B-CPAP人甲状腺癌细胞

用于CXCR4受体反应系统调控甲状腺乳头状癌细胞迁移,侵袭作用的机制研究
研究SDF-1/CXCR4系统调节甲状腺乳头状癌细胞迁移,侵袭的作用及相关分子机制.
材料和方法:1.材料82例人甲状腺乳头状癌组织手术切除标本;B-CPAP购于上海中乔新舟生物科技公司.
2. 方法(1)免疫组化检测人甲状腺乳头状癌组织标本中CXCR4的表达.
(2)体外培养人甲状腺乳头状癌细胞株(B-CPAP).设计并合成CXCR4基因CDS区,构建CXCR4过表达的质粒.B-CPAP细胞转染CXCR4过表达质粒或对应的vector(空载质粒),瞬转获得B-CPAP-vector和B-CPAP-CXCR4细胞.转染48小时后,免疫印迹和荧光定量实验检测各组细胞中CXCR4的表达水平.
(3)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用100ng/ml的SDF-1处理48小时.然后通过划痕实验检测各组细胞迁移能力;通过Transwel l实验检测各组细胞侵袭能力.
(4)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用100ng/ml的SDF-1处理48小时.然后免疫印迹检测E-cadherin(上皮-钙黏素),N-cadhe rin(神经-钙黏素),Vimentin(波形蛋白),NF-κB,磷酸化的IκB(P-IκB)以及细胞核内NF-κB的表达水平.免疫荧光实验检测E-cadherin的表达情况.
(5)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒24小时后,用5µmol NF-κB抑制剂BAY11-7028(BAY)预处理1小时,然后加入100ng/ml的SDF-1处理48小时.免疫印迹实验检测NF-κB,P-IκB以及细胞核内NF-κB的水平;划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力.
结果:(1)免疫组化检测结果显示CXCR4在甲状腺乳头状癌组织中高表达;
(2)免疫印迹和荧光定量检测结果显示转染CXCR4过表达质粒后,B-CPA P-CXCR4细胞中CXCR4表达明显增加;
(3)在B-CPAP细胞中转染CXCR4过表达质粒后,用SDF-1处理,细胞的迁移性和侵袭性显著增强;
(4)SDF-1/CXCR4明显减少了E-cadherin蛋白表达量,增加了N-cadhe rin蛋白,Vimentin蛋白的表达量.免疫荧光检测E-cadherin蛋白发现,SDF-1/CXCR4系统可以明显抑制E-cadherin的表达量.表明SDF-1/CXCR4系统促进B-CPAP的EMT过程;
(5)SDF-1/CXCR4系统可以显著性提高细胞核中NF-κB的表达量,降低细胞质中NF-κB的表达量,降低细胞中P-IκB的表达量,激活NF-κB信号通路;
(6)免疫印迹实验表明NF-κB抑制剂BAY可以提高E-cadherin表达量,降低N-cadherin,Vimentin表达量,抑制了SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP的EM T过程的促进作用;划痕实验表明NF-κB抑制剂BAY可以减弱SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP迁移能力的促进作用;Transwell实验表明NF-κB抑制剂BAY可以减弱SDF-1/CXCR4系统对B-CPAP侵袭能力的促进作用.
结论:(1)CXCR4受体反应系统可加强NF-κB通路的信号传导,促进甲状腺乳头状癌细胞的EMT过程,加强乳头状癌细胞的迁移侵袭.
(2)NF-κB通路的抑制剂BAY可削弱CXCR4受体反应系统对甲状腺乳头状癌细胞EMT过程的促进作用,减轻CXCR4受体反应系统对甲状腺乳头状癌细胞的促迁移侵袭作用.NF-κB通路可望成为抑制甲状腺乳头状癌细胞迁移侵袭的潜在治疗靶点.
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