CAL-78 人软骨肉瘤细胞系

CAL-78人软骨肉瘤细胞系可以用于双调蛋白—E-钙黏蛋白表达调控对人软骨肉瘤细胞增殖,侵袭,迁移能力影响的实验研究
探究双调蛋白对软骨肉瘤的影响及相关机制,也涉及探究软骨肉瘤细胞的上皮间质转化的过程,有助于人类加深对软骨肉瘤的认知,也对今后软骨肉瘤的诊断治疗的进步有着重要的意义.
方法:将一定浓度的双调蛋白配入完全培养基中,并将软骨肉瘤细胞系SW1353与CAL-78放入该培养基中培养获取受到双调蛋白影响的软骨肉瘤细胞.通过转染双调蛋白的Si RNA获得内源性双调蛋白下调的细胞,同时使用MEK抑制剂U0126和PI3K抑制剂LY294002处理细胞后获得阻断了相关通路的软骨肉瘤细胞,并将这些细胞再次以双调蛋白处理后进行下一步试验.采取Transwell侵袭实验,CCK8实验,划痕实验,黏附实验分别测量各组细胞的侵袭,增殖,迁移,黏附能力.利用Real-Time PCR和Western Blot实验测得了实验过程中E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白,SLUG等相关因子的蛋白和基因水平的变化.
结果:一,双调蛋白作用于软骨肉瘤细胞系SW1353及CAL-78后,两种细胞的侵袭力增强,且E-钙黏蛋白表达下降而N-钙黏蛋白,SLUG的表达上升,MEK/ERK和PI3K/AKT通路的相关蛋白磷酸化水平上升.
二,转染双调蛋白Si RNA,MEK抑制剂U0126和PI3K抑制剂LY294002处理后的软骨肉瘤细胞再次予以双调蛋白处理后,以上表现则受到抑制.
三,本实验还发现双调蛋白作用于软骨肉瘤细胞后,其迁移,增殖及黏附能力也有所增强,且Snail,Twist1等其他上皮间质转化过程中重要的调控因子的基因表达也有所上升.本研究所有试验重复三次,统计学检测p值均小于0.05,结果有显著性差异.
结论:本研究表明,双调蛋白通过下调E-钙黏蛋白的表达来增强软骨肉瘤细胞侵袭.MEK/ERK和PI3K/AKT通路与上皮间质转化过程可能参与这一过程.同时,双调蛋白对软骨肉瘤细胞的增殖,迁移和黏附能力也有增强的作用.
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