5637人膀胱癌细胞来自一名68岁男性白人的膀胱癌组织,现常用于泌尿系统疾病的发病机理研究.5637贴壁生长,显微镜下呈上皮细胞样,能生成SCF,IL-1,IL-3,IL-6,G-CSF,GM-CSF等.该细胞经本库STR鉴定结果无误,且支原体检测阴性. 5637人膀胱癌细胞推荐使用RPMI1640培养基,含10%胎牛血清,在37度,5%CO2培养箱中培养.5637建议每周2-3次更换新鲜培养基,按1:3至1:4进行传代,37度胰酶消化3-4分钟,传代周期通常为2-3天.特别注意的是,该细胞相对较难消化,需要延长消化时间,消化到细胞收缩变圆,轻拍培养瓶侧边,细胞可以滑落方可终止消化.
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5637人膀胱癌细胞可以用于SPTBN2基因在膀胱癌中的表达及对膀胱癌5637细胞增殖,迁移和侵袭的影响
研究非红细胞血影蛋白β2(Spectrin Beta,Non-Erythr℃ytic 2,SPTBN2)在膀胱癌组织中的表达,与临床病理因素的相关性,以及对膀胱癌5637细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响.
方法:(1)通过TCGA数据库和GSE13507数据集,分析SPTBN2在膀胱癌中的表达情况,以及与患者预后和临床病理因素的相关性.
(2) 通过单基因GSEA分析和蛋白互作分析,研究SPTBN2可能涉及的信号通路和生物学功能.
(3) 采用RNA干扰技术(RNA interfering,RNAi)沉默膀胱癌5637细胞中SPTBN2的表达,实验分为空白对照组(blank control group,Blank组),阴性对照组(negative control group,NC组),siRNA#1实验组和siRNA#2实验组.实验组转染靶向SPTBN2 siRNA,NC组转染通用阴性siRNA,空白对照组加入等量转染试剂.实时荧光定量PCR检测细胞中SPTBN2基因的表达水平,Western blot检测细胞内SPTBN2蛋白的表达量.CCK-8法检测膀胱癌5637细胞增殖情况.划痕实验,Transwell侵袭实验检测细胞迁移,侵袭能力.
结果:(1)本研究基于对TCGA膀胱癌数据集和GSE13507数据集的分析发现SPTBN2在膀胱癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织,高表达SPTBN2的患者预后较低表达SPTBN2患者差,差异具有统计学意义(P<0.05).SPTBN2在膀胱癌中的表达量与T分期(OR=2.152,95%CI=1.390-3.364,P<0.001),N分期(OR=1.935,95%CI=1.257-2.999,P=0.003)和组织学类型(OR=10.313,95%CI=2.941-65.289,P=0.002)存在相关性.
(2) 单基因GSEA富集分析显示,SPTBN2相关差异基因主要富集在KRAS信号通路.KEGG富集分析显示,SPTBN2相关互作蛋白主要富集于细胞凋亡,肿瘤蛋白多糖,线粒体自噬,缝隙连接,膀胱癌信号通路.GO富集分析显示,SPTBN2相关互作蛋白在分子功能分类中主要富集于细胞骨架结构形成,血影蛋白结合,离子通道结合.在细胞组分分类中主要富集于轴突始段,轴突主干,轴突部分.在生物过程分类中,富集于轴突导向,神经元投射引导,膜电位调节.SPTBN2与MAPK信号通路相关基因KRAS(r=0.338,P<0.001),RAF1(r=0.362,P<0.001),MAP2K1(r=0.338,P<0.001),MAPK1(r=0.382,P<0.001),EGFR(r=0.360,P<0.001)具有相关性,差异具有统计学意义.
(3)转染SPTBN2 siRNA后,实验组的SPTBN2转录水平和SPTBN2蛋白表达量均低于阴性对照组和空白对照组.实验组的增殖,迁移和侵袭能力较阴性对照组降低,差异具有统计学意义(P<0.05).
结论:(1)SPTBN2在膀胱癌中的表达量增加,与膀胱癌发展相关,高表达SPTBN2的膀胱癌患者预后较差.
(2)沉默SPTBN2能够抑制膀胱癌5637细胞的增殖,迁移和侵袭能力.
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