Anti-FITC抗体
Anti-FITC抗体是一类可以特异性结合FITC的单克隆抗体,主要用于检测FITC的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中FITC水平.用纯化的FITC抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入FITC,再与HRP标记的FITC抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的FITC呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中FITC浓度. FITC形态为黄色粉末,有吸湿性,是一种生化试剂,也是医学诊断药物,可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断.
📌 参考资料/链接：
Effects of Taishan Robinia pseudoacacia Polysaccharides on immune function in chickens[J].Man-fei Liang,Guan-hua Liu,Qing-you Zhao,Shi-fa Yang,Shi-xun Zhong,Guo-lin Cui,Xiao-hua He,Xue Zhao,Fan-xia Guo,Cun Wu,Rui-liang Zhu.International Immunopharmacology.2013(4)
📄 详细内容
用于灰树花多糖的FITC荧光标记及Caco-2细胞模型对其的吸收与转运研究
对灰树花多糖进行荧光标记,并通过Caco-2细胞模型对其吸收与摄入展开研究,为GRN的药代动力深入研究提供帮助.
首先,通过Sevag及分步沉淀等方法完成GRN初步纯化,再经DEAE-纤维素和Sephadex G-100凝胶柱层析纯化得到GRN纯品,经苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量为95.7%.其次,利用GRN末端的还原性与酪胺(Tyr)完成还原胺化反应,膜分离去除过剩Tyr等小分子,获得纯化的GRN-Tyr共价偶联物,再利用GRN-Tyr中Tyr的氨基基团与异硫氰酸荧光素(FITC)进行亲核反应,完成GRN荧光标记,最后通过Sephadex G-100柱层析获得纯化的GRN-Tyr-FITC.
通过苯酚硫酸法跟踪检测每步反应的产物糖原含量;PAGE电泳比较各反应产物迁移率(Rx);紫外光谱扫描跟踪反应产物是Tyr280nm,FITC490nm的特征吸收峰;荧光光谱扫描合成后的GRN-Tyr-FITC激发波长与发射波长.计算GRN-Tyr-FITC中FITC的取代度,并对其进行稳定性实验.结果表明GRN-Tyr,GRN-Tyr-FITC二次标记成功;GRN-Tyr-FITC可以荧光定量检测(Ex:490nm,Em:520nm),尽管其激发波长,发射波长均有细微红移;GRN-Tyr-FITC可在避光4℃条件下稳定保存30天;分批合成的GRN-Tyr-FITC取代度达0.039%-0.060%(W/W).最后,选用Caco-2细胞Transwell单层培养模型,可快速模拟肠道吸收转运多糖能力.
体外建立Caco-2细胞单层培养模型,并通过检测跨膜电阻(TEER),显微形态观察及标志物渗漏方法保证其完整性和紧密性.
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