ANTI-VEGF-C POLYCLONAL ANTIBODY
Anti-ACTA2 Rabbit Mon℃lonal Antibody是一类可以特异性结合Anti-ACTA2的单克隆抗体,主要用于检测Anti-ACTA2的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中Anti-ACTA2水平.用纯化的Anti-ACTA2抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Anti-ACTA2,再与HRP标记的Anti-ACTA2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的Anti-ACTA2呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中Anti-ACTA2浓度.
📌 参考资料/链接：
Difference gel electrophoresis[J].Jonathan S.Minden,Susan R.Dowd,Helmut E.Meyer,KaiStühler.ELECTROPHORESIS.2009(S1)
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用于MMP1通路轴对乳腺癌转移的研究
调控MMP1分泌的相关分子以及调控方式,为乳腺癌肺转移的基础和实验研究提供靶点.
方法:(1)人乳腺癌细胞株MDA-MB-231与V2M4细胞总蛋白与MMP1特异性抗体做免疫共沉淀,寻找与MMP1直接作用的蛋白;质谱分析所有免疫共沉淀蛋白并行western验证发现其中高低转移株的差异蛋白(ACTA2);
(2)以实时定量PCR检测相关蛋白mRNA水平变化;
(3) 以激光共聚焦证明细胞内MMP1与ACTA2蛋白确实存在结合;
(4) 以蛋白表达证明及Pull down实验表明蛋白相互作用的直接性;
(5) 构建ACTA2基因沉默质粒并稳定转染V2M4,进一步做western及实时定量PCR检测MMP1的表达;进行细胞侵袭实验及增殖实验,三维凝胶实验;免疫缺陷鼠乳房垫注射后观察体内成瘤及肿瘤肺转移情况;
(6) ACTA2病毒过表达载体构建,MDA-MB-435及MDA-MB-231转染,流式细胞仪筛选稳定转染细胞,并行ACTA2基因沉默质粒构建并稳定转染V2M4进一步做western及实时PCR检测MMP1表达情况,行细胞侵袭实验及增殖实验,三维凝胶实验;
(7) 利用含钙及无钙DMEM培养基检测钙对MMP1分泌的影响;
(8) 构建肌动蛋白特异性载体(pro-50)检测ACTA2聚合与解聚对MMP1分泌的影响;筛选钙特异性配体门控通道,得到TRPV6表达差异;
(9)构建TRPV6基因沉默载体并稳定转染Vb行体内体外实验证明钙通道对MMP1分泌的影响;以TRPV6的兴奋剂与抑制剂进一步验证实验结果.
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