CELL COUNTING KIT-8 (CCK-8试剂盒)
CELL COUNTING KIT-8(CCK-8试剂盒)是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒. WST-8工作原理:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan).颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比.使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量.
📌 参考资料/链接：
Cytotoxic clerodane diterpenoids from the leaves of Premna tomentosa[J].Young-Won Chin,William P.Jones,Qiuwen Mi,Ismail Rachman,Soedarsono Riswan,Leonardus B.S.Kardono,Hee-Byung Chai,Norman R.Farnsworth,Geoffrey A.Cordell,Steven M.Swanson,John M.Cassady,A.Douglas Kinghorn.Phyt℃hemistry.2006(12)
📄 详细内容
用于体外抗肿瘤药物筛选中CCK-8,MTT和SRB法的比较研究
比较CCK-8,MTT,SRB三种检测细胞增殖方法的相关性,重复性,稳定性和灵敏性,探讨使用三种方法进行抗肿瘤药物体外筛选的适应性.方法将悬浮生长的人红细胞白血病细胞K562和贴壁生长的人肝癌细胞HepG2调整成1×103-1×106／ml之间的十个细胞浓度种于96孔板,分别用CCK-8,MTT和SRB法检测其光密度(OD)值,比较三种方法的相关性;
三种方法分别重复三次,比较其重复性;于九个不同时间点测定其OD值,比较其稳定性;检测四个待测样品和两个已知抗肿瘤药对两株细胞的增殖抑制率,比较其灵敏性.
结果三种方法测得两株细胞的OD值与细胞密度的相关系数(r)大于0.888(P＜0.05).三种方法重复三次测得的OD值之间的相关系数大于0.956(P＜0.05).CCK-8法和MTT法测得的OD值随时间的延长而增加:CCK-8法72h测得的OD值为0h的6-7倍(P＜0.05),MTT法72h测得的OD值为0h的1.5倍(P＜0.05)左右,而SRB法1-72h不同时间点测得的OD值与0h相比无显著性差异(P＞0.05).
六个受试物分别用MTT法和SRB法测得的K562和HepG2半数抑制浓度(IC50)无显著性差异(P＞0.05),而用CCK-8法测得的IC50低于MTT法和SRB法测得的结果(P＜0.05),以顺铂为例,MTT法和SRB法测得的IC50值约是CCK-8法的2-4倍和6倍.结论CCK-8,MTT,SRB法测得的OD值与细胞数目之间有良好的相关性;三种方法均有良好的重复性;SRB法的稳定性优于MTT法和CCK-8法;三种方法均可用于体外抗肿瘤药物筛选,贴壁细胞和悬浮细胞均适用,所得结果相似;CCK-8法较MTT法和SRB法更为灵敏和便捷,但实验成本相应增加,更适应于微量样品的大规模筛选.
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