CTLA4 IG-24中国仓鼠卵巢细胞
CTLA4 IG-24中国仓鼠卵巢细胞是一种实验室常见的贴壁细胞系.1957年,Puck TT从成年中国仓鼠卵巢的活检组织建立了CHO细胞;广泛用于生物制品的表达.
📌 参考资料/链接：
Conduits Mediate Transport of Low-Molecular-Weight Antigen to Lymph Node Follicles[J].Ramon Roozendaal,Thorsten R.Mempel,Lisa A.Pitcher,Santiago F.Gonzalez,Admar Verschoor,Reina E.Mebius,Ulrich H.von Andrian,Michael C.Carroll.Immunity.2009(2)
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用于CTLA4-Ig重组慢病毒引流淋巴结定向表达的研究
研究CTLA4-Ig直接淋巴结注射后其表达效率,CTLA4-Ig重组慢病毒转染成熟树突状细胞后相关基因的表达,局部注射转染后的成熟树突状细胞后观察CTLA4-Ig在引流淋巴结内的表达,探索淋巴结直接基因治疗方法的可行性;试图通过局部细胞治疗诱导免疫耐受,降低全身免疫抑制剂的用量,为同种异体复合组织移植探索新途径.
方法:1．大鼠淋巴结内注射CTLA4-Ig重组慢病毒,观察CTLA4-Ig在淋巴结内的表达.
2．贴壁培养法体外诱导成熟树突状细胞,进行形态学鉴定,活性及表型鉴定,体外鉴定其免疫学功能.
3．体外试验研究CTLA4-Ig重组慢病毒转染大鼠成熟树突状细胞,观测CTLA4-Ig的表达时间及表达高峰.
4．体内试验研究CTLA4-Ig重组慢病毒转染的成熟树突状细胞于大鼠引流淋巴结的定向表达.
结果:1．实时荧光定量PCR及冰冻切片示,空白对照及阴性对照组淋巴结内均无CTLA4-Ig的表达.CTLA4-Ig重组慢病毒淋巴结内注射组有明显的CTLA4-Ig表达.
2．光镜见培养的成熟树突状细胞集落分散,悬浮,分布较均匀.扫描电镜见细胞表面大量褶皱与粗细不等的突起.流式细胞术显示成熟树突状细胞表面的DC功能相关抗原MHC II,CD80,CD86均高表达.
功能试验检测其分泌IL-12能力较未成熟树突状细胞强,混合淋巴细胞反应显示其有强的刺激T细胞增殖的能力.活细胞率为(80.34±1.25)%.
3．慢病毒转染成熟树突状细胞76h后,于倒置荧光显微镜下可观察到荧光表达.随时间延长,荧光表达增多,细胞形态亦出现老化.转染后第7d细胞明显老化.Q-PCR示CTLA4-Ig重组慢病毒转染成熟树突状细胞第3天,于mRNA水平有CTLA4-Ig的表达,western blotting检测所示结果与Q-PCR一致.
4．距大鼠腋固有淋巴结处2公分皮下缓慢注射所收获的CTLA4-Ig重组慢病毒转染后第3天的DCs,术后第4天取材,Q-PCR显示注射CTLA4-Ig重组慢病毒转染的DCs组于淋巴结内可检测到CTLA4-Ig的表达.
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