CCK试剂盒

CCK试剂盒可以用于SCD1促进低氧乏养胰腺癌细胞铁死亡抵抗作用及机制研究
探讨胰腺癌H/NS的微环境下,SCD1对胰腺癌细胞铁死亡调控的分子机制,为诱导胰腺癌细胞铁死亡提供新的治疗策略.
研究方法:(1)CCK-8法检测Erastin,RSL3,柳氮磺胺吡啶对胰腺癌细胞铁死亡的作用;显微镜下观察细胞数量及形态;CCK-8法检测H/NS培养条件下铁死亡诱导剂(Erastin,RSL3,柳氮磺胺吡啶)处理24 h后PANC1和Patu8988细胞的活性.丙二醛(MDA)检测试剂盒测定细胞内MDA水平.
(2) 蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染GPX4 sh RNA的PANC1细胞中GPX4蛋白表达水平和CCK-8法检测转染GPX4 sh RNA的PANC1细胞H/NS下培养24 h后的细胞活性.
(3) 应用生物信息学方法分析SCD1在胰腺癌中的表达及临床意义.荧光定量PCR和Western blot检测H/NS下,胰腺癌细胞(PANC1,Patu8988,BXPC3,SW1990)中SCD1的表达量.
(4) 应用人单不饱和脂肪酸(MNSFA)ELISA试剂盒检测H/NS下PANC1和Patu8988中单不饱和脂肪酸(MUFAs)的含量.
(5) TCGA数据库分析胰腺癌组织中SCD1与铁死亡相关基因的相关性.荧光显微镜,Western blot及q RT-PCR验证SCD1在人胰腺癌细胞PANC1和Patu8988中的干扰效率.SYTOX Green染色,CCK-8法检测H/NS下,干扰SCD1对PANC1和Patu8988细胞铁死亡的影响.MNSFA ELISA试剂盒检测H/NS下,干扰SCD1对人胰腺癌细胞株PANC1和Patu8988中MUFAs含量的影响.
(6) MDA检测试剂盒检测H/NS下,Erastin处理后干扰SCD1的PANC1和Patu8988细胞MDA水平的变化.细胞核染料PI染色,CCK-8法检测SCD1抑制剂A939572与Erastin联用对胰腺癌细胞活性的影响.BODIPY-C11581/591染色检测不同处理组:DMSO组,Erastin组,A939572组,Erastin+A939572组的PANC1细胞的脂质过氧化程度并拍摄图片.
(7) 构建鼠源性胰腺癌细胞Panc02皮下瘤模型,随机分为DMSO组,Erastin组,A939572组,Erastin+A939572组.测量每组小鼠肿瘤体积,治疗14天后解剖皮下瘤测量每组肿瘤大小.裂解皮下瘤组织,MDA检测试剂盒检测各处理组小鼠肿瘤组织的MDA水平.
研究结果:(1)CCK-8法结果显示Erastin,RSL3,柳氮磺胺吡啶诱导胰腺癌细胞铁死亡.显微镜观察和CCK-8检测结果均证明与正常培养条件下(Nor)相比,H/NS可以诱导PANC1和Patu8988细胞的铁死亡抵抗,且PANC1和Patu8988细胞MDA水平下降.
(2)Western blot结果显示:干扰GPX4的PANC1细胞GPX4蛋白表达和细胞活力明显降低,而在H/NS条件下,细胞活力几乎没有变化.
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