ANTI-NESTIN抗体
ANTI-NESTIN抗体是一类可以特异性结合ANTI-NESTIN的多克隆抗体,主要用于检测ANTI-NESTIN的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 检测原理:双抗体夹心法测定标本中ANTI-NESTIN水平.用纯化的ANTI-NESTIN抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-NESTIN,再与HRP标记的ANTI-NESTIN抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的ANTI-NESTIN呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中ANTI-NESTIN浓度.
📌 参考资料/链接：
Cell Biology and Pathology of Pod℃ytes[J].Anna Greka,Peter Mundel.Annual Review of Physiology.2012
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用于中间丝蛋白Nestin在糖尿病肾病发病中的作用及机制研究
通过建立糖尿病大鼠模型和体外培养条件性永生化足细胞,探讨nestin在糖尿病肾小球足细胞损伤中的作用及机制,为进一步阐明糖尿病肾病的发病机制及其防治提供理论依据.
方法:中间丝蛋白Nestin在糖尿病大鼠肾组织的表达Wistar大鼠随机分为2组:对照组(Control)和糖尿病组(Diabetes mellitus,DM).DM组大鼠按65mg/kg体重腹腔注射STZ(溶于0.1M的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液,pH4.5),对照组大鼠注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液.48h后测定血糖和尿糖,血糖≥16.7mmol/L且尿糖阳性者(+++-++++)作为糖尿病(DM)大鼠.
分别于成模后4,8,12,16周,每组各取5只大鼠,留取24h尿液和血清后,处死大鼠切取肾脏.部分肾组织分别置于4%多聚甲醛和4%的戊二醛固定液中固定,用于光镜,免疫组织化学和电镜检测;
部分肾脏皮质用于分离肾小球,提取肾小球总RNA和蛋白.免疫组织化学和Western blot检测肾小球内nestin,p-nestin,vimentin,Cdk5/p35蛋白的表达;
免疫荧光双染色检测nestin与vimentin,Cdk5,WT1,α-SMA,synaptopodin,laminin等的共同表达情况;免疫共沉淀检测nestin与vimentin蛋白的结合情况;Real-time PCR检测肾小球中nestin,vimentin和Cdk5m RNA的表达.
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