8305C(人甲状腺癌细胞)
8305C(人甲状腺癌细胞)是一种人甲状腺癌细胞系,常被用于生物医学研究,特别是甲状腺癌的发病机制,药物筛选和治疗方法研究等领域.这种细胞系来源于一名甲状腺癌患者的肿瘤样本,并在实验室中经过连续传代培养得到. 8305C(人甲状腺癌细胞)具有贴壁生长的特性,形态上通常呈现为上皮样细胞.在细胞培养中,需要使用含有适当比例的胎牛血清(FBS)和抗生素的培养基来维持其生长.细胞传代时,通常使用胰蛋白酶或胰酶-EDTA溶液进行消化,并按照适当的比例进行传代. 由于8305C(人甲状腺癌细胞)来源于甲状腺癌,因此它们具有甲状腺癌细胞的典型特征,如能够表达甲状腺癌相关的基因和蛋白质.这使得8305C(人甲状腺癌细胞)成为研究甲状腺癌发病机制的理想模型.科学家们可以利用这种细胞系研究甲状腺癌的发生,发展和转移机制,以及评估不同治疗策略对甲状腺癌细胞的疗效. 除了常规的细胞培养实验外,8305C(人甲状腺癌细胞)还可以用于基因表达分析,信号通路研究,药物敏感性测试等.这些研究有助于科学家们更深入地了解甲状腺癌的发病机制,发现新的治疗靶点,以及评估不同治疗策略对甲状腺癌患者的疗效. 需要注意的是,8305C(人甲状腺癌细胞)是一种肿瘤细胞系,因此在实验过程中需要遵守相关的生物安全规定和操作规程.同时,对于实验结果的分析和解读,也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑.
📌 参考资料/链接：
Cancer Statistics,2017[J].Rebecca L.Siegel MPH;;Kimberly D.Miller MPH;;Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2017(1)
📄 详细内容
8305C(人甲状腺癌细胞)可以用于GATAD2A基因沉默对甲状腺癌细胞增殖,周期及凋亡影响的研究
分析GATAD2A基因沉默对人甲状腺癌细胞株Cal-62,8305C(人甲状腺癌细胞)的增殖,周期及细胞凋亡的影响,从而为甲状腺肿瘤的临床诊断,治疗,预后判断提供参考,为甲状腺癌基因诊断及治疗提供新的靶点.
方法1.构建慢病毒载体sh GATAD2A,转染293T细胞,并行转染率检测及病毒滴度测定;2.用RNAi慢病毒颗粒分别转染人甲状腺癌细胞Cal-62和8305C(人甲状腺癌细胞)细胞株,筛选后,应用RT-PCR,Western Blot及斑点印迹法分别在m RNA和蛋白水平检测基因GATAD2A的干扰效果.
3. 通过四唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪来分别检测sh GATAD2A(S1,S2)及sh Con干扰GATAD2A后8305C(人甲状腺癌细胞)增殖及细胞周期情况.
4. 采用流式细胞仪分析技术及caspases-3蛋白,PARP检测法检测GATAD2A沉默后8305C(人甲状腺癌细胞)的凋亡情况.
5. 统计学方法:所有实验重复3次.统计结果采用软件SPSS 17.0行t检验或单因素方差分析,P<0.05具有统计学意义.
结果1.成功构建三个重组质粒,分别为sh Con(通用阴性对照质粒),sh GATAD2A(S1)和sh GATAD2A(S2),三质粒系统共转染293T细胞,测得的转染率>90%,转染后产生的慢病毒颗粒滴度检测分别为:sh Con:7.0E+06 Tu/ml;sh GATAD2A(S1):4.0E+06Tu/ml;sh GATAD2A(S2):7.0E+06 Tu/ml.
2. RNAi慢病毒颗粒成功转染至8305C(人甲状腺癌细胞)中,转染效率达到80%以上.检测结果显示sh GATAD2A(S1,S2)转染的甲状腺癌细胞在m RNA及蛋白质水平明显低于阴性对照组.
3. GATAD2A基因沉默后8305C(人甲状腺癌细胞)的生长速度明显低于阴性对照;G0/G1期细胞比例明显减少,而G2/M期细胞比例明显增加.
4. GATAD2A基因沉默后8305C(人甲状腺癌细胞)凋亡指数明显高于对照组;凋亡相关蛋白caspases-3及衍生物PARP含量明显高于对照组.
结论1.成功构建及包装RNAi慢病毒载体,获得高滴度的RNAi慢病毒颗粒.2.包装后的RNAi慢病毒颗粒成功转染8305C(人甲状腺癌细胞),并且有效的抑制了GATAD2A基因的表达.3.RNA干扰沉默GATAD2A基因的表达可明显抑制8305C(人甲状腺癌细胞)的增殖,并且使8305C(人甲状腺癌细胞)周期阻滞.
4.RNA干扰沉默GATAD2A基因表达可以促进8305C(人甲状腺癌细胞)的凋亡.
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