184A1人乳腺上皮细胞系是一种常用的细胞系,被广泛应用于乳腺上皮细胞相关的基础研究和应用研究.以下是关于该细胞系的一些基本信息: 背景:184A1细胞系来源于一名女性乳腺癌患者的手术标本,并通过一系列的传代培养而建立.这些细胞形态上类似于正常的乳腺上皮细胞,但具有无限增殖的能力. 形态特征:上皮细胞样. 培养条件:通常需要在37℃,5%CO2和95%湿度的条件下进行培养,并使用特定的培养基进行营养支持. 用途:广泛用于研究乳腺癌的发生,发展,治疗和预防等方面,以及测试新的药物和治疗方法的效果.
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184A1人乳腺上皮细胞系可以用于趋化因子受体CCR7在乳腺癌细胞转移中的机制探讨
利用RNA干扰技术,以乳腺癌细胞为研究对象,下调乳腺癌细胞系中的基因CCR7的表达对乳腺癌细胞转移的影响,并行蛋白质谱检测,研究沉默CCR7后哪些蛋白和信号分子参与CCR7的调控作用,对探讨CCR7与乳腺癌转移的内在机制,发现新的诊断标记物及治疗靶点具有积极的意义.
方法:1,常规培养乳腺癌细胞系MDA-MB-231,4T1-luc,MDA-MB-361,T47D,MDA-MB-468,MCF-7,MCF10A,184B5,184A1人乳腺上皮细胞系,HCC1806,HCC1937,HCC1580,MCF10A,用q-PCR和Westen blot实验筛选出高表达CCR7的乳腺癌细胞系.
2,对筛选出来的乳腺癌细胞株进行转染,提取实验组(CCR7-siRNA)和对照组的总RNA和总蛋白,用q-PCR和Western blot检测干扰效果.
3,利用划痕实验和transwell小室迁移实验检测了siCCR7转染对乳腺癌细胞迁移的影响.
4,通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白,并用q-PCR验证参与CCR7的调控作用关键蛋白.
结果:1,高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选q-PCR结果显示:人乳腺癌细胞株T47D,HCC1500,SK-RB-3,BT474,MCF7的CCR7的mRNA表达水平较其他乳腺癌细胞株高.高表达CCR7的乳腺癌细胞系的筛选Western blot结果显示:CCR7在小鼠乳腺癌细胞株4T1-Luc,人乳腺癌细胞株T74D,MCF7中高表达,在部分乳腺癌细胞株中如MB231,MB468,HCC1937中有较高水平的表达.但是在正常乳腺细胞株如184B5,184A1人乳腺上皮细胞系和MCF10A中几乎无CCR7表达.最后我们选取MCF7及T47D乳腺癌细胞进行后续的实验.
2,T47D,MCF7细胞在经过siRNA处理后,通过q-PCR检测对T47D,MCF7乳腺癌细胞的沉默效应,结果显示CCR7-siRNA和CCR7-siRNA能非常有效地抑制T47D,MCF7细胞中内源性CCR7的mRNA水平的表达.Western blot得到相似的结果.
3,乳腺癌细胞系MDA-MB-231,4T1-luc,MDA-MB-361,T47D,MDA-MB-468,MCF-7,MCF10A,184B5,184A1人乳腺上皮细胞系,HCC1806,HCC1937,HCC1580,MCF10A划痕实验和transwell小室迁移实验结果均表明,与shLacZ组比,shCCR7C组和shCCR7D组乳腺癌细胞迁移能力变弱.
4,乳腺癌细胞系MDA-MB-231,4T1-luc,MDA-MB-361,T47D,MDA-MB-468,MCF-7,MCF10A,184B5,184A1人乳腺上皮细胞系,HCC1806,HCC1937,HCC1580,MCF10A通过蛋白质谱结果筛选出差异表达蛋白如下:EPHA2,PVR,SQSTM1,ANXA6,PTRF,ALDH3A2,EPCAM.并用q-PCR方法及Western blot方法验证沉默CCR7后ALDH3A2和PTRF可能参与CCR7的调控作用.
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