AHH-1人外周血B淋巴细胞系是一种人类白血病细胞系,来源于一名急性淋巴细胞白血病患者的外周血.该细胞系具有B淋巴细胞特异性表面标志物,如CD19,CD20,CD22等,并且能够分化为浆细胞和记忆B细胞. AHH-1人外周血B淋巴细胞系在免疫学研究中被广泛应用,例如用于研究B淋巴细胞的增殖,分化和功能,以及用于筛选和评估抗肿瘤药物的疗效.此外,AHH-1细胞系还可以用于研究B淋巴细胞相关疾病的发病机制和治疗方法.
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AHH-1人外周血B淋巴细胞系可以用于不同剂量-(60)Coγ射线致AHH-1细胞旁效应差异表达基因的研究
利用基因芯片技术对不同剂量60Coγ射线致AHH-1细胞旁效应差异表达基因进行初步研究.研究内容
1. 研究不同剂量60Coγ射线照射人淋巴母细胞(AHH-1)及与其共同培养未照射细胞基因的差异表达.
2. 不同剂量60Coγ射线致AHH-1细胞及旁效应细胞FHIT mRNA及蛋白表达变化的研究.
3. 不同剂量60Coγ射线致AHH-1细胞及旁效应细胞PTEN mRNA表达变化的研究.
实验方法1.正常人淋巴母细胞(AHH-1)经0.5Gy和2Gy 60Coγ(0.36Gy/min)射线照射后分别与未照射正常细胞(旁效应细胞)共同培养8h;应用人cDNA芯片对旁效应细胞,直接照射细胞和正常细胞进行检测,分析差异表达基因;选取差异表达1.5倍以上的基因按照生物学过程,分子功能,细胞中组分三大功能进行聚类分析筛选基因.
2. 正常人淋巴母细胞(AHH-1)经0.5Gy和2Gy 60Coγ(0.75 Gy/min)射线照射后分别与未照射正常细胞(旁效应细胞)共同培养8h,对FHIT mRNA进行qRT-PCR,Western Blot在分子及蛋白水平进行验证,对PTEN mRNA进行实时荧光定量PCR验证.
3. 统计学方法:单样本t检验.
结果1.发现γ射线照射AHH-1及其旁效应细胞基因存在差异表达;不同剂量直接照射细胞及其旁效应细胞差异表达的基因各不相同;旁效应细胞(0.5Gy)和正常对照组比较:差异表达基因(差异在1.5倍以上)171个,其中上调56个,下调115个;旁效应细胞(2.0Gy)和正常对照组比较:差异表达基因165个,其中上调106个,下调59个;旁效应细胞细胞(0.5Gy)与直接照射细胞(0.5Gy)比较:差异表达基因226个,其中上调161个,下调65个;旁效应细胞(2.0Gy)与直接照射细胞(2.0Gy)比较:差异表达基因365个,其中上调177个,下调188个;直接照射细胞(2.0Gy)与直接照射细胞(0.5Gy)比较:差异表达基因397个,其中上调309个,下调88个;旁效应细胞(2.0Gy)与旁效应细胞(0.5Gy)比较:差异表达基因222个,其中上调197个,下调25个.
经聚类分析后发现:旁效应细胞(0.5Gy)和正常对照组比较:差异表达基因20个;旁效应细胞(2.0Gy)和正常对照组比较:差异表达基因18个;旁效应细胞(0.5Gy)和直接照射组(0.5Gy)比较:差异表达基因12个;旁效应细胞(2.0Gy)和直接照射组(2.0Gy)比较:差异表达基因19个.这些差异表达的基因涉及到信号转导,细胞周期调节,免疫球蛋白,DNA修复等基因.
同时也发现了3个在各个样本中都有变化的基因.另外,热休克60kDa蛋白1(heatsh℃k 60kDa protein 1,HSPD1)基因表达在0.5Gy及2.0Gy旁效应细胞,0.5Gy照射细胞均上调,而在2.0Gy照射细胞中下调.
2.直接照射及旁效应细胞的FHIT基因表达呈下降趋势,但变化不显著(P>0.05).FHIT蛋白表达水平结果表明直接照射及旁效应细胞的FHIT蛋白表达均呈下降趋势,照射剂量为0.5Gy时,其变化不显著;随照射剂量的增加,FHIT蛋白表达下降趋势显著,尤其是照射剂量达2.0Gy以上时,FHIT蛋白表达显著下降,存在比较明显的剂量依赖性.将旁效应细胞与直接照射细胞进行比较,其下降幅度不如直接受照细胞显著.
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