C127小鼠乳腺肿瘤细胞

用于苯达莫司汀(Bendamustine)诱导小鼠乳腺癌细胞凋亡及其机制的研究
观察抗癌药物苯达莫司汀对体外培养的小鼠乳腺瘤细胞系C-127生长抑制及其作用机制,以期在细胞水平上为治疗乳腺癌提供相关的理论依据.
方法:细胞增殖检测方法:采用形态学观察和细胞记数法检测苯达莫司汀对C127细胞形态和存活率的影响;细胞凋亡检测方法:用吖啶橙染色法,在荧光显微镜下观察细胞核的形态变化和凋亡小体;TUNEL法检测DNA的片段化;
细胞凋亡和坏死的鉴别:检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放区分坏死和凋亡;p53蛋白表达测定:免疫荧光结合激光共聚焦扫描显微技术测定细胞中p53的表达情况;细胞周期的变化:流式细胞术检测苯达莫司汀对C127细胞周期的影响.
结果:1．相差显微镜观察显示:苯达莫司汀20µg／ml作用C127细胞24h之后细胞形态无明显变化,48h后细胞表现出凋亡的特征,细胞突起变少,细胞中颗粒和空泡增加,细胞核明显增大.苯达莫司汀40µg／ml作用C127细胞24h,48h后细胞都表现出凋亡的特征,48h后可见少量的凋亡小体.
2．细胞计数表明:苯达莫司汀对C127的生长有明显抑制作用,并呈明显的剂量时间依赖性.
3．吖啶橙染色显示:苯达莫司汀可使C127细胞核内染色质凝集,核片段化以及出现凋亡小体.
4．TUNEL检测表明:药物处理后,C127细胞呈现DNA的片断化以及核片断化.
5．LDH活性检测显示:C127细胞采用苯达莫司汀20µg／ml处理48h后,与对照组相比培养液中LDH含量无明显差异(P＞0.05),苯达莫司汀40µg／ml处理48小时,与对照组相比培养液中LDH含量明显升高(P＜0.05).
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