AKR1C2抗体是一种可以特异性结合CCT2的人工合成抗体,可以靶向结合人,小鼠,大鼠和猪样品中的CCT2蛋白.LIMK-1单克隆抗体适用于Western印迹(WB),免疫沉淀(IP),免疫荧光(IF),石蜡包埋切片免疫组化(IHCP),流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附试验(ELISA).醛-酮还原酶家族1成员C2(AKR1C2)是庞大的醛-酮还原酶超家族的成员,该超家族以NADPH依赖性方式代谢一系列底物.AKR1C2是负责将雄激素5α-二氢睾酮(DHT)代谢并失活成3α-雄烷二醇的3-α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD).研究证实,在晚期前列腺癌病例中AKR1C2表达增加.AKR1C2和相关的还原酶AKR1C3均通过将前列腺素D2还原成更稳定的9α,11β-PGF2α,增强前列腺癌中的PI3K/Akt信号转导(2).此外,研究证实一些卵巢子宫内膜异位症标本中AKR1C2表达增加,表明AKR1C2参与促进卵巢子宫内膜异位症中的孕酮代谢.
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AKR1C2抗体可以用于启东肝癌中AKR1C2基因的突变,表达特征及其致癌机制研究
以AKR1C2(Aldo-Keto ReductaseⅠCⅡ)序列(AB02165)为信息探针,利用生物信息学同源筛选的方法,拚接其全长序列,对其结构与功能进行预测.以乙型肝炎病毒(HBV)感染,黄曲霉毒素B1(AFB1)污染,P53基因高度突变为主因的启东高发区肝癌患者(共170例)及启东肝癌细胞株QGY7703为研究对象,以AKR1C2为目标基因,参照生物信息学模拟分析结果,借助分子细胞生物学手段,如RT-PCR,Northern blot,Southern blot,western blot,5’,3’-RACE,PCR-SSCP,直接序列分析,免疫组化,原位杂交,多克隆抗体的制备,真核转染,基因框移突变的构建,体内外致瘤能力测定,基因表达芯片,反义基因转染,免疫共沉淀,酵母双杂交等,对AKR1C2基因在启东肝癌及其癌旁组织中的突变,表达特征及其致肝癌机制进行研究.
本研究中RACE分析结果显示:AKR1C2 cDNA全长序列为1865bp,5’非编码序列为253bp,3’非编码序列为640bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,开放阅读框(ORF)为972bp.所扩增的长度为的985bp的AKR1C2基因的片段(以ORF设计引物),用同位素掺入标记做为杂交探针,与印有36种人类组织mRNA的MTN膜进行Northern杂交.结果显示人类AKR1C2基因的表达谱:心,胎盘,直肠,肝,骨骼肌,卵巢,前列腺,大肠,盲肠,胸腺,睾丸,附睾,输卵管,盲肠,鼻,乳房,胃组织中AKR1C2中均检出一种大约为1.9kb的剪接本,在毛发组织中检出一种大约为1.2kb的剪接本.在肝脏,前列腺,大肠,盲肠,附睾,输卵管中表达远远高于其它组织,即存在一定的组织表达特异性.迭加AKR1C2-GFP及抗-线粒体荧光染色结果,显示其定位于线粒体膜上.AKR1C2 cDNA原核表达产物经变性,复性,纯化后,确定为42Ku,其等电点为7.5,并经Western blot,等电聚焦凝胶电泳证实.免疫兔后产生的抗体滴度为1:10000(ELISA测定).抗血清纯化后,以l:2000,1:4000,l:5000稀释,经AKR1C2抗体Western blo七证实该抗体在42Ku处出现一条带.为了检测AKR:CZ蛋白在人不同肿瘤细胞系中的表达情况,选取人食管癌细胞系EC8712,人前列腺癌细胞系DU-450和TSU-pZ,人结肠癌细胞系HR8348,人肝癌细胞系BEL74OZ,人肝癌细胞系QGY7703,人肺腺癌细胞系GLC82和LTEP-aZ,并经常规培养后提取其蛋白.AKR1C2抗体Western blot分析表明,在42Ku处出现印迹带.
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