9L 大鼠胶质瘤细胞系

9L大鼠胶质瘤细胞系可以用于脑肿瘤干细胞RNA致敏树突状细胞治疗9L脑肿瘤的实验研究
研究选用9L大鼠胶质瘤细胞系作为研究对象,首先,利用无血清悬浮培养法从9L大鼠胶质瘤细胞系中诱导培养出胶质瘤干细胞样细胞,并对其干细胞特性进行观测.然后,提取9L脑肿瘤干细胞及9L贴壁细胞总RNA,转染F344骨髓源性DCs,制备DC疫苗;最后,建立9L/F344大鼠颅内胶质瘤模型,对其进行DC疫苗治疗,观察脑胶质瘤干细胞RNA致敏DC的疗效.第一部分大鼠9L脑肿瘤干细胞的培养和鉴定
建立9L大鼠胶质瘤细胞系的体外培养和扩增方法,并从细胞形态,特异性标志物的表达及其致瘤性进行观察.
方法:选择9L大鼠胶质瘤细胞系,分别应用含血清培养基(DMEM/F12+10%FBS)和无血清培养基(DMEM/F12+20ng/mLbFGF+20ng/mLEGF)培养.通过无血清悬浮培养方法,从大鼠9L胶质瘤细胞系中培养获得呈悬浮生长的9L肿瘤球;对9L肿瘤球细胞的一般形态,免疫表型,多向分化能力进行观察.为对比9L贴壁细胞和9L肿瘤球细胞致瘤性的差异,将9L胶质瘤细胞及9L肿瘤球细胞分别注射入宿主近交系F344大鼠右侧尾状核,对肿瘤组织进行CD133和Nestin免疫组织化学检测,并对动物生存期进行观察.
结果:9L大鼠胶质瘤细胞系细胞在含血清培养基中呈贴壁生长,长出突起,呈短梭形,长梭形,星形,长纤维形;9L胶质瘤细胞在无血清培养基中,则呈悬浮状态生长,形成悬浮肿瘤克隆球,这些肿瘤球经0.01%胰酶消化后,能传代至少1个月以上.经免疫组织化学染色及流式细胞仪检测,大部分贴壁9L细胞及9L肿瘤球细胞均表达CD133和Nestin.将9L肿瘤球转入含血清培养基中,进行诱导分化,能产生表达神经元(NSE),星形胶质细胞(GFAP)和少突胶质细胞(Galc)的子代肿瘤细胞.将贴壁9L细胞及9L肿瘤球细胞接种入近交系F344大鼠颅内后14天,贴壁9L细胞与9L肿瘤球细胞所形成的肿瘤表型相似,经免疫组织化学染色发现,两者形成的肿瘤均呈CD133和Nestin阳性.9L肿瘤球细胞注射组所形成的肿瘤体积较大,更具侵袭性,其浸及周围正常脑组织的范围更广.
注射9L大鼠胶质瘤细胞系细胞组大鼠的中位生存期为21天,而注射9L肿瘤球细胞组的中位生存期为15天,经Kaplan-Meier分析,发现荷9L肿瘤球细胞组的生存期明显短于注射贴壁9L细胞组(P<0.001).
结论:9L大鼠胶质瘤细胞系中存在具无限增殖,自我更新及多向分化潜能的肿瘤干细胞样细胞,利用含bFGF和EGF的无血清培养基可对大鼠9L胶质瘤细胞系中的肿瘤干细胞样细胞进行有效扩增.但CD133和Nestin不能作为9L肿瘤干细胞的特异性标志物,9L脑肿瘤干细胞仅是CD133阳性细胞中的一部分.
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