9号培养基

用于多重耐药鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药机制研究
测临床分离鲍曼不动杆菌中携带的β-内酰胺酶基因及外排泵基因,体外诱导鲍曼不动杆菌对多粘菌素B产生耐药,以探讨其对多粘菌素B的耐药机制.
方法:1,连续收集临床分离的63株非重复多重耐药鲍曼不动杆菌,采用微量肉汤稀释法测定亚胺培南,美罗培南,头孢他啶,头孢吡肟,左氧氟沙星,环丙沙星,阿米卡星,多粘菌素B及头孢哌酮舒巴坦的最低抑菌浓度(MICs).
2,采用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)获得63株鲍曼不动杆菌的指纹图谱并进行同源性分析.
3,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶基因TEM,AmpC,OXA-23,KPC,IMP,VIM,外排泵基因adeB,adeG,adeJ,adeR,adeS,两组份调节系统基因pmrA,pmr B.
4,采用体外实验对收集的菌株进行诱导耐药,以获得多粘菌素B耐药的鲍曼不动杆菌.
5,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测诱导耐药菌株及原始敏感菌株的外排泵基因adeB,adeJ,adeG及两组份调节系统基因pmrA,pmr B的m RNA表达情况,分析其表达差异.
6,对负责脂质A生物合成的基因lpxA/lpxC/lpxD及两组份调节系统基因pmr A,pmrB进行PCR扩增并将扩增产物测序,探讨耐药菌株是否发生特异性突变.
7.采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对诱导耐药的菌株及原始敏感菌株进行检测,分析其蛋白质差异.
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