A101D人黑色素瘤贴壁细胞系

A101D人黑色素瘤贴壁细胞系可以用于光动力治疗对黑色素瘤细胞侵袭,增殖能力的影响及其机制研究
以小鼠黑色素瘤细胞B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系进行研究,研究5-ALA-PDT对黑色素瘤细胞系迁移和侵袭能力的影响及其机制,同时也探查了光敏剂5-ALA促进PDT从而影响黑色素瘤细胞的增殖的相关机制,为光动力治疗黑色素瘤提供理论依据和数据支持.
一. ALA-PDT抑制A101D人黑色素瘤贴壁细胞系和B16-F10(鼠)迁移和侵袭及其机制研究:1.ALA-PDT抑制黑色素瘤细胞A375和B16-F10体外迁移和侵袭能力:利用细胞划痕实验检测黑色素瘤细胞迁移能力时发现,2.4J,4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系12h及24h后的迁移率相比较空白对照组明显降低(p<0.001).
同时利用Transwell小室实验检测黑色素瘤细胞侵袭能力,
结果显示:2.4J,4.8J ALA-PDT处理24h后,B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系通过Matrigel基质胶的细胞数量少于空白对照组A375细胞侵袭数目(p<0.001).2.ALA-PDT处理后,A375,B16-F10自分泌炎症因子mRNA的下调:
2.4J,4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A375细胞12h及24h后对两种细胞自分泌炎症因子IL-1,IL-6,IL-8,TNF-α,TGF-βm RNA水平进行染料q-PCR检测,发现在光动力治疗能量及时间对两种细胞系炎症因子分泌的影响都呈现一定剂量依赖的关系,但仅TGF-βm RNA水平在两株细胞内均有不同程度下调(P<0.05).
ALA-PDT处理后,A375,B16-F10自分泌炎症因子蛋白的下调:2.4J,4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A375细胞12h及24h后对A375,B16-F10自分泌炎症因子IL-1,IL-6,IL-8,TNF-α,TGF-β蛋白水平进行ELISA检测,与mRNA定量检测结果一致,光动力治疗能量及时间对两种细胞分泌到胞外炎症因子的水平的影响同样呈现一定剂量依赖的关系,仅TGF-β有不同程度下调(P<0.05).
外源性添加TGF-β逆转了PDT对A375,B16-F10迁移和侵袭的能力的抑制:回补10ng/ml TGF-β进行反向验证,分组为:空白对照组,TGF-β组,4.8J PDT组,4.8J PDT+TGF-β组,使用细胞划痕实验检测,结果发现回补TGF-β逆转PDT对A375,B16-F10迁移能力的抑制(P<0.05);使用Transwell小室检测,结果发现回补TGF-β逆转PDT对A375,B16-F10细胞侵袭能力的抑制(P<0.05).
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