ANTI-PARKIN抗体
ANTI-PARKIN抗体是ANTI-PARKIN为抗原制得的免疫抗体,可以特异性结合PARKIN.主要用于检测PARKIN的Western Blot,IHC-P,IF,ELISA,Co-IP等多种免疫学实验. 分子遗传学研究证明parkin基因是常染色体隐性遗传性少年型帕金森综合征(AR-JP)的致病基因,其表达产物parkin蛋白具有E3泛素-蛋白连接酶活性.Parkin蛋白可能在维持多巴胺能神经元的正常功能中发挥重要作用,而parkin蛋白功能障碍可能与帕金森病的发病有关. 目前已经鉴定了几种parkin蛋白的底物蛋白,使我们能够初步了解帕金森病发病的分子和细胞学机理,这对于我们最终搞清帕金森病的发病机制,开发相应的治疗药物具有极其重要的意义.
📌 参考资料/链接：
Autophagy and mitophagy in diabetic cardiomyopathy[J].Satoru Kobayashi,Qiangrong Liang.BBA-Molecular Basis of Disease.2014
📄 详细内容
用于Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在糖尿病心肌病中的作用研究
构建糖尿病心肌病模型,观察Pink1/Parkin通路及线粒体自噬水平在糖尿病心肌病中的变化.利用Parkin基因敲除小鼠和培养原代心肌细胞,在在体和离体水平明确Pink1/Parkin通路是否参与糖尿病心肌损害的发生.原代心肌细胞过表达Parkin后给予自噬抑制剂3-MA,证实Pink1/Parkin通路通过调节线粒体自噬参与糖尿病心肌病的发生.
[研究方法]1.挑选40只8周龄,体重18-22g的C57雄性小鼠,随机分为2组:正常组(Control)和糖尿病心肌病组(DM).2.DM组小鼠每天以50 mg/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ),连续注射5天,检测空腹血糖大于11.1mmol/L确定为糖尿病造模成功.造模成功后,继续饲养8周,建立糖尿病心肌病模型.超声检测小鼠心脏功能.
3. HE和MASSON染色观察心肌组织的病理改变.4.TUNEL法检测心肌组织中心肌细胞的凋亡.5.透射电镜下观察小鼠心肌组织中线粒体的形态和自噬体的形成.6.Western-blot检测心肌组织中Pink1,Parkin,Mfn1,Mfn2,Nix,Beclin1,P62,LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的蛋白水平.
7. 将C57和Parkin-/-小鼠随机分为四组:正常C57小鼠组(WT),糖尿病C57小鼠组(WT-STZ),正常Parkin基因敲除小鼠组(Parkin)和糖尿病Parkin基因敲除小鼠组(Parkin-STZ).糖尿病模型建成后,继续饲养8周.8周末,超声检测各组小鼠的心功能.
8. 培养原代心肌细胞,随机分为以下6组:A:阴性对照组(5.5 mmol/L葡萄糖):Con+Lac Z;B:正常Parkin过表达组(5.5 mmol/L葡萄糖):Con+Parkin;C:正常Parkin过表达+3-MA干预组(5.5 mmol/L葡萄糖):Con+Parkin+3-MA;D:高糖阴性对照组(33 mmol/L葡萄糖):HG+Lac Z;E:高糖Parkin过表达组(33 mmol/L葡萄糖):HG+Parkin;F:高糖Parkin过表达+3-MA干预组(33 mmol/L葡萄糖):HG+Parkin+3-MA.9.TUNEL法检测原代心肌细胞的凋亡.
10.透射电镜下观察原代心肌细胞中线粒体的形态和自噬体的形成.11.荧光显微镜观察心肌细胞中GFP-LC3阳性的细胞数.12.Western-blot检测心肌细胞中Pink1,Parkin,Mfn1,Mfn2,Drp1,Nix,Beclin1,P62,LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的蛋白水平.
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