BV2小鼠小胶质细胞来源于1990年,应用携带癌基因v-raf/v-myc的反转录病毒J2感染原代培养的小鼠小胶质细胞而获得的永生细胞系.免疫组化结果显示BV2为MAC1,MAC2阳性,而MAC3,胶质细胞原纤维酸性蛋白,半乳糖脑苷脂为阴性.且是高度纯化的永生细胞系,同时该细胞系具备了原代培养的小胶质细胞的形态学,表型以及各项功能特点,相较于原代培养的细胞而言,永生化的细胞系培养起来更为容易.因此目前被广泛的运用于科研究当中.
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BV2小鼠小胶质细胞可以用于宽筋藤三种成分对LPS诱导BV2小胶质细胞神经炎症反应的影响
研究宽筋藤正丁醇部提取物Tinosinenside A(HD-1),1-[2-(furan-2-yl)-2-oxoethyl]pyrrolidin-2-one(HD-13),2-isopropyl-5-phenylmethyl-imidazolidinone-4-one(HD-17)对Aβ25-35损伤的PC12细胞保护作用,及抑制LPS诱导BV2小鼠小胶质细胞神经炎症反应的药效与机制研究.
方法:1,选取非甾体抗炎药为阳性参照,分子对接法预测HD-1,HD-13,HD-17抗炎靶点;2,以20µM Aβ25-35损伤PC12细胞24h为模型,MTT法检测HD-1,HD-13,HD-17作用后细胞存活率;3,HD-1,HD-17预防性给药4h,1µg/m L LPS刺激BV2小鼠小胶质细胞24h建立神经炎症模型.MTT法检测药物对BV2细胞活力影响;Griess法检测细胞上清液NO水平;Elisa法检测细胞上清液炎性因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达水平;RT-PCR法检测IL-1β,IL-6,TNF-α,COX2,i NOS m RNA相对表达水平;Western blot法检测NFκB/NLRP3/Caspase 1通路靶点:NFκB P65,Phospho-NFκB P65,IκBα,Phospho-IκBα,炎性小体NLRP3/ASC/Caspase1,COX2,i NOS的相对表达.
结果:1,HD-1,HD-13,HD-17满足Lipinski类药性五规则,具有较好的类药性,且有较好肠道吸收和易透过血脑屏障.对接结合能δA HD-1﹤非甾体抗炎药平均结合能≈HD-17﹤HD-13,HD-1与NFκB/NLRP3/Caspase 1通路靶点对接结合能较低,且能形成较多利于稳定结合的氢键和疏水作用;
2,HD-1,HD-13,HD-17在10-200µM浓度区间对PC12细胞无毒性作用,与模型组相比HD-1在25-100µM浓度区间能提高PC12细胞存活率,而具有神经保护作用,HD-13,HD-17对PC12细胞存活率略有提高,但不具显著性差异;
3,HD-1,HD-17在12.5-200µM浓度区间或与1µg/m L LPS共孵育时对BV2小鼠小胶质细胞无毒性作用;HD-1,HD-17在50-200µM浓度区间能显著降低炎性介质NO,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,下调i NOS,IL-1β,IL-6,TNF-α,COX2 m RNA相对表达,抑制NFκB/NLRP3/Caspase 1通路蛋白表达而发挥抑制神经炎症作用.
结论:分子对接结果显示宽筋藤正丁醇提取物HD-1可能具有较好的抗炎活性,且对NFκB/NLRP3/Caspase1炎症通路对接结合能较低,稳定结合可能性大;HD-1对Aβ25-35损伤的PC12细胞具有保护作用;HD-1,HD-17能显著降低LPS诱导BV2小鼠小胶质细胞神经炎症反应中炎性介质水平,下调炎性因子m RNA表达,可能通过抑制NFκB/NLRP3/Caspase1通路蛋白表达而发挥抑制神经炎症作用.
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