16HBE细胞又称人支气管上皮样细胞,人支气管上皮细胞主要功能:(1)支气管表面的上皮细胞构成了基底柱状结构,清除粘液纤毛.(2)由纤毛,无纤毛和能分泌黏液的细胞等混合细胞群组成物理屏障,可有效防止多种有毒物质.(3)产生和分泌大量化学介质和细胞因子形成高度复杂的宿主防御系统.16HBE细胞专用培养基主要用于人支气管上皮样细胞的培养.
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1.复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL16HBE细胞专用培养基混合均匀.在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀.然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜).第二天换液并检查细胞密度.
2.细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养.
1)弃去培养上清,用不含钙,镁离子的PBS润洗细胞1-2次.
2)加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化.
3)按6-8ml/瓶补加16HBE细胞专用培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀.
4)将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml16HBE细胞专用培养基的新皿中或者瓶中.
3.细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存.下面T25瓶为类;
1)细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数.
2)4min1000rpm离心去掉上清.加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10 6 /ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识.
3)将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存.记录冻存管位置以便下次拿取.
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