C-KIT抗体
C-KIT抗体也称为CD117抗体,是一个非偶联,抗c-Kit多克隆抗体.这种抗体可用于人,小鼠,大鼠,猴子等多种背景下的WB,IHC-F,IHC-P,ICC/IF,ELISA等实验,并且不带标记. C-KIT基因最初被鉴定为猫肉瘤病毒致癌基因v-kit的同系物,通常被称为原癌基因c-Kit.C-KIT抗体特异性地结合到这种糖基化跨膜蛋白上,该蛋白具有一个N端胞外区,该区具有五个免疫球蛋白样结构域,一个跨膜区和一个位于C端的胞内酪氨酸激酶结构域.当被其细胞因子配体,干细胞因子(SCF)激活后,该蛋白会磷酸化多种细胞内蛋白,这些蛋白在许多细胞类型的增殖,分化,迁移和凋亡中发挥作用.因此,C-KIT抗体在造血,干细胞维持,配子发生,黑色素生成以及肥大细胞的发育,迁移和功能等方面都有重要的应用价值. C-KIT兔单克隆抗体则是通过用c-Kit蛋白对小鼠进行系统免疫,再取出脾脏细胞筛选出只分泌单一c-Kit蛋白抗体的B淋巴细胞,然后将此B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行杂交得到的.这种抗体广泛用于免疫组织化学,以帮助区分组织学组织切片中的特定类型的肿瘤.例如,C-KIT兔单克隆抗体可用于研究胃肠道间质瘤(GIST)中c-kit和PDGFRA基因突变的检测和临床诊断,为进一步的生物靶向治疗提供依据. 在制备和鉴定C-KIT抗体时,需要遵循一定的步骤和方法.首先,需要通过特定的方法制备出抗体,并进行效价的鉴定,包括试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等.然后,需要评估抗体的特异性,即与相应抗原或近似抗原物质的识别能力.此外,还需要测定抗体的亲和力,即抗体和抗原结合的牢固程度.
📌 参考资料/链接：
Advances in regenerative therapy:A review of the literature and future directions[J].Edward H.Ntege;;Hiroshi Sunami;;Yusuke Shimizu.Regenerative Therapy,2020
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C-KIT抗体可以用于c-kit+心脏祖细胞表达和分泌内皮细胞特征蛋白的研究
c-kit+心脏祖细胞(cardiac progenitor cells,CPCs)在缺血性心肌病的治疗中具有重要作用,但该细胞的属性仍未完全清楚.本实验将主要探究:1.从蛋白层面证明c-kit+CPCs可以表达和分泌内皮细胞特征相关的蛋白;2.c-kit+CPCs缺氧处理后,检测c-kit+CPCs表达和分泌细胞因子的变化.
研究方法:1.取成年雄性C57BL/6小鼠心脏切成约1mm3碎块,用II型胶原酶和胰蛋白酶消化成单个细胞培养扩增后,免疫磁珠标记进行c-kit+CPCs分选,免疫荧光,流式细胞术检测纯度.2.设置心肌细胞对照组(Car组),c-kit+CPCs正常培养组(c-kit组),蛋白芯片检测内皮细胞特征蛋白及相关细胞因子的表达.3.检测缺氧处理对c-kit+CPCs分泌功能的影响:用缺氧小室对分选后的第三代c-kit+CPCs进行缺氧处理,缺氧处理组(c-kit hyp组)在37℃,5%二氧化碳,95%N2中培养,正常组(c-kit nor组)在37℃,5%二氧化碳和21%O2中培养.每组分别设置3,6,12小时.收集细胞培养上清液进行C-KIT抗体蛋白芯片检测,收集细胞裂解物进行蛋白印记(WB)检测.
C-KIT抗体研究结果:1.根据细胞表面标记c-kit进行阳性分选后获得高纯度c-kit+细胞,细胞呈现梭形,短棒状,形态较分选前明显统一,生长良好.2.分选后第三代细胞进行表面C-KIT抗体鉴定,几乎所有细胞呈现C-KIT抗体标记的红色荧光,流式细胞术鉴定发现分选前的混合细胞中c-kit+细胞比例约在1.34%,分选后细胞纯度约在95%,且在我们的培养体系下表面标志物可以稳定表达.3.c-kit组比Car组表达增加的因子有:内皮素-1(Endothelin-1),半胱氨酸蛋白61(Cysteine-rich 61,Cyr61),FGFbasic,胎盘生长因子2(Placenta Growth Factor-2,Pl GF-2)(P<0.05),这些因子具有内皮细胞分泌,在血管生成中起一定作用的特点.
4..C-KIT抗体hyp 3h组比c-kit nor 3h组表达增加的因子有:CXC趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16),Angiopoietin-1,FGF basic,IL-1beta,人血小板衍生生长因子BB(Platelet derived growth factor,PDGF-BB),肝细胞生长因子(hepat℃yte growth factor,HGF),神经调节蛋白-1(Neuregulin-1,NRG-1)(P<0.05);c-kit hyp6h组和c-kit nor 6h组,蛋白芯片结果对比未发现有明显差异;c-kit hyp 12h组比c-kit nor 12h组表达增加的因子有:血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)(P<0.05).
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