BNL CL.2 小鼠胚胎肝细胞

用于鼠胎肝干细胞的体外分离培养及体内移植的实验性研究
改进大鼠胎肝干细胞的分离纯化方法,提高肝脏干细胞分离的纯度和活力.
方法:1,购清洁级别近交系孕15天SD大鼠,利用械剪碎酶消化法分离获得肝干细胞,后经简单的离心分离法以及胰蛋白酶选择性消化法进行进一步的纯化,得到较为纯化的肝干细胞.加入含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,显微镜下观察细胞贴壁情况及形态学变化.
2,将卵圆细胞接种于预先用0.2%明胶处理的盖玻片上置于24孔培养板中,37℃,5%CO2孵箱培养24小时,至细胞长成单层后行免疫荧光化学检测.细胞消化传代,对P10代细胞进行免疫组织化学检测.分别检测P1和P10代肝干细胞表面标志物CD34,C-Kit,0V6,CK19的表达情况结果分离的大鼠胎肝干细胞接种培养瓶24h后开始贴壁,5d后细胞体积增大,呈梭形或多边形.经1-2次差异性消化传代后,细胞呈集落样生长,边缘清晰且折光率强.免疫细胞化学检测示:P1代大鼠胎肝干细胞C-Kit,甲胎蛋白(AFP)抗原,OV6,细胞角蛋白(CK)19呈阳性表达,不表达ALB.P10代肝干细胞C-Kit,CK19,OV-6及CD34呈阳性表达.
结论:此方法在原代即可获得形态均一,增殖速度快,性状稳定的LSCs,且具有操作简单,快捷,实用,对细胞损伤小等优点,为深入研究肝干细胞生物学特性和进行体内移植实验提供了物质基础.
大鼠肝损伤后成熟肝细胞和卵圆细胞在肝再生中的作用背景长期以来,成熟肝细胞和卵圆细胞在损伤肝的再生中如何发挥作用一直是肝干细胞研究领域的核心问题,对两者在损伤肝再生中的作用也有着不同的观点.
一方面,有报道认为部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后大鼠肝可在二周内再生并恢复至原来大小,有人连续进行了12次PH后发现仍能完成肝再生:这种肝再生多被认为是单独由成熟肝细胞分裂增殖完成的.另一方面,在损伤肝再生中发挥了作用的,起源于门管区小胆管和Hering’s管的卵圆细胞(OVC)被认为可能是肝内源性的具有肝胆双向分化潜能的成体肝干细胞.
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