4-羟基香豆素
血栓栓塞性疾病,包括静脉血栓栓塞和动脉血栓,在全世界具有高发病率和死亡率.4-羟基香豆素 (4HC) 类口服抗凝剂通常用于治疗血栓栓塞性疾病.在过去的几十年里,开发了石油衍生的化学品,如苯酚,乙酰水杨酸为起始材料来化学合成 4HC,然而,石油枯竭和环境问题的日益凸显,开发利用可再生资源的生物过程是非常重要的.
📌 参考资料/链接：
Microbial biosynthesis of the anticoagulant precursor 4-hydroxycoumarin.
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为了确定限速步骤,作者设计并进行了体外互补实验,将过量的纯化SdgA和/或BIS3补充到表达完整途径的大肠杆菌细胞的粗提取物中.在不添加酶的情况下,在所需辅因子存在的情况下,粗提取物只能以极低的速率(0.18 mg l-1 h-1)将水杨酸盐转化为4-羟基香豆素;而纯化的SdgA和BIS3的存在显著提高了速率(8.82 mg l −1 h −1),表明纯化的酶在该检测系统(阳性对照)中功能良好.在粗提物中单独添加纯化的SdgA时,转化率没有明显提高(0.24 mg l −1 h −1).值得注意的是,当单独添加纯化的BIS3时,4-羟基香豆素的形成恢复到与阳性对照相当的速率(7.83 mg l -1 h -1),这表明BIS3是该生成途径的主要瓶颈.随后作者用下部模块中的PqsD编码序列替换了BIS3基因,生成了质粒 pZE-PqsD-SdgA(pZE-PS).携带PZE-PS的大肠杆菌菌株完全转化水杨酸,最后转化成4-羟基香豆素.
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