从保种平板上挑取少量保藏编号为CCTCCNO:M2013144的弯孢聚壳菌D-1的菌丝体,接种到250mL三角瓶中进行种子培养,每个三角瓶装100mL的PDB培养基,28℃摇床恒温培养,转速180r/mIn,培养3.5天后获得种子液.然后将种子液按照5％v/v的接种量接种到装有200mL固体发酵培养基的20mm×20cm培养皿中进行扩大培养,置于20℃静置培养45天获得发酵液.将上述培养得到的发酵液过滤,分别获得菌体和菌液;菌液用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液蒸干溶剂得到第一部分浸膏;菌体用二氯甲烷:甲醇＝1:1超声提取3次,30mIn/次,浓缩提取液至无有机溶剂,加水混悬,用等体积乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液蒸干溶剂得到第二部分浸膏;将上述第一部分浸膏和第二部分浸膏合并获得总提物.
将上述总提物经减压液相柱色谱VLC,以石油醚:乙酸乙酯＝100:1,80:1,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,0:1为溶剂进行梯度洗脱,根据TLC薄层层析显色合并相似流分,得到20个组分Fr.A-T;组分Fr.K经反相高效液相纯化,条件为65％甲醇/水,流速2mL/mIn,检测波长为280nm,保留时间为37分钟,得到化合物1;保留时间为39分钟,得到化合物2.
EudesmanolIde倍半萜类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗菌药物中的应用.所述抗菌药物指的是抗大肠杆菌药物,抗枯草芽孢杆菌药物,抗金黄色葡萄球菌药物,抗粪肠球菌药物,抗绿脓杆菌药物.体外抗菌实验结果显示,本发明的化合物对大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,粪肠球菌,绿脓杆菌的生长都具有强烈的抑制活性,其抑菌活性MIC值大小与阳性对照药氨苄西林相当.
本发明的化合物1和化合物2eut-GuaIanesesquIterpene的抑菌活性和抗菌谱优于文献报道的同类化合物13-hydroxy-3,8,7(11)-eudesmatrIen-12,8-olIde的抑制活性;本发明化合物1对枯草芽孢杆菌的抗菌活性MIC值为2μg/mL(8.1μM),远优于化合物13-hydroxy-3,8,7(11)-eudesmatrIen-12,8-olIde的抗菌活性(18.1μM).