基于结构改造策略,研究者设计了一类具有吡咯[3,2-d]嘧啶核心骨架的衍生物,通过引入特异性取代基实现对ALK/c-Met的高选择抑制.关键合成路线包括:
1.以4-氯嘧啶-5-甲醛为起始原料,与胺类化合物在叔丁醇/三氟乙酸体系中进行缩合反应
2.通过钯催化偶联或亲核取代引入芳胺结构
3.在碱性条件下进行磺酰化,酰胺化等后修饰,得到终产物
例如化合物ID-3采用两步法合成:首先将2-甲硫基苄胺与嘧啶醛缩合生成中间体(收率70%),再与4-吗啡啉基哌啶在微波辅助下进行胺化反应,经反相HPLC纯化获得目标分子.
体外激酶抑制实验表明,多个化合物对EML4-ALK阳性细胞系显示出纳摩尔级抑制活性:
-化合物ID-3对EML4-ALK-BaF3的IC50为3.2nM
-对克唑替尼耐药株EML4-ALK(L1196M)-BaF3仍保持12.8nM活性
-靶向选择性指数(野生型BaF3/突变型)高达>1000
在肿瘤细胞系筛选中,ID-3对肺癌H3122细胞的抑制IC50达8.5nM,显著优于阳性对照药物.其作用机制经Westernblot验证可通过剂量依赖性降低phospho-ALK和phospho-STAT3水平,阻断下游信号传导.